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β-1,4-内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

李春华;廖贵芹;张桂敏;马立新

  运用选择性培养基LBCMC从环境土样中分离得到一株能利用羧甲基纤维素的芽孢杆菌Bacillus sp.NW-2004 a,并运用“鸟枪”克隆法构建了其基因组文库,且从此基因组文库中筛选得到两个阳性克隆.对其中一阳性克隆中插入的DNA片段(命名为GLUD)进行序列测定,发现了一长度为2 502 bp的开放阅读框(ORF),可编码834个氨基酸.BLAST分析结果表明,该基因与Bacillus sp.KSM-S237来源的纤维素酶基因AB018420具86%相似性,所编码的多肽与Bacillus sp.KSM-64来源的β-1,4-内切葡聚糖酶具89%的相似性,故该基因是一新发现的β-1,4-内切葡聚糖酶基因.该序列已收录于Genebank,登录号AY663839.另外,以CpoI andNotI限制性内切酶双酶切衍生于质粒pGEX的大肠杆菌表达载体pHBM625,然后将经T4 DNA polym erase处理后的β-1,4-内切葡聚糖酶基因克隆至载体pHBM625中得到重组质粒pH-BM625G lu,最后通过平板检测及SDS-PAGE凝胶电泳,均检测到该基因在大肠杆菌XL10-G lod中的表达.……   
[关键词]:基因组文库;β-1;4-内切葡聚糖酶基因;大肠杆菌表达
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《湖北大学学报(自然科学版)2005年03期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)