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乙肝病毒X基因慢病毒载体的构建和鉴定

陈豪;李丹;林纳;黄月红;陈志新;王小众

  目的构建乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白的重组慢病毒载体pRRLsincPPT-hPGK-X-IRES-eGFP-WPRE(pRRL-X),并感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,以验证其在体外的感染效率。方法采用PCR技术扩增出HBV X基因的DNA片段,用IN-Fusion技术构建表达载体pRRL-X并鉴定,jet-PEI转染试剂与三质粒共转染293T细胞后浓缩、计算慢病毒颗粒的滴度;用慢病毒液感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,120 h后初步观察慢病毒颗粒的感染情况。Real-time PCR和Western blot法检测细胞HBV X基因的表达。结果成功构建HBV X基因的慢病毒表达载体质粒pRRL-X。经293T细胞包装后,用慢病毒感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,120 h后被感染的细胞内可见强弱不等的荧光。结论成功构建HBV X慢病毒表达载体。……   
[关键词]:肝炎病毒;乙型;肝细胞;基因;病毒;遗传载体;质粒;慢病毒感染;慢病毒属;聚合酶链反应
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《福建医科大学学报2011年03期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)