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一种获得大片段克隆的SMART全长cDNA文库构建方法

董志敏;李英慧;张宝石;关荣霞;常汝镇;邱丽娟

  针对SMART方法中PCR扩增削减了大片段基因所占比例,使文库中很难获得大片段克隆的问题,进行了方法改进。在原始SMART方法的基础上,以大豆叶片为材料,通过琼脂糖凝胶分级分离技术,将PCR扩增后合成的dscDNA分成3个等级,分别与载体连接、转化,构建相应亚库,每个亚库容量在1.0×106左右,重组率接近99%。改进方法所建文库的平均全长率53.6%,与改进前的(52.2%)相当。插入片段范围为0.5~3.5kb,最大插入片断长度比改进前的提高1.5kb。该方法提高了SMART方法中大片段克隆的获得率,为大豆功能基因组学研究提供了保障。……   
[关键词]:改进的SMART法;扩增后cDNA分级分离;全长cDNA文库;大片段克隆
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《大豆科学2006年03期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)