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重组幽门螺杆菌AhpC基因的克隆表达及其初步纯化

张卫军;邹全明;毛旭虎;罗萍;解庆华

  目的克隆表达幽门螺杆菌(helicobacter pylori)AhpC基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌的疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出AhpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-11c中,重组载体pET-AhpC经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。采用阴离子交换层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR扩增的AhpC基因长度为597bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因片段与GenBank公布的序列相似性达98%,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导目的蛋白占总蛋白的28.7%,经纯化后,蛋白纯度达70%以上。Western blot检测该蛋白与兔抗Hp的多克隆抗血清发生结合反应。结论成功构建了AhpC表达载体pET-AhpC,并在大肠杆菌中高效表达。……   
[关键词]:幽门螺杆菌;AhpC基因;克隆
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《重庆医学2006年11期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)