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His-tag标记的嗜热菌来源L-脯氨酸脱氢酶的纯化与性质

林乐懿;张丽叶;末信一郎;郑海涛;白石智美;桶崎陽友

  以引入了His-tag做标记的超嗜热菌Thermococcus profundus色素依存性L-脯氨酸脱氢酶基因片段为目的基因,在宿主大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)CompetentCells中表达目的蛋白。细胞培养液经超声菌体破碎、热处理、NiSepharose层析分离,得到纯度较高的His-tag色素依存性L-脯氨酸脱氢酶,比酶活是纯化前的5倍。纯化后的酶液经凝胶电泳分离得到片段为58600,40200,22300的3段短肽。通过对该酶性质的初步探索,得出在温度50℃,体系pH8.0,300mmol/LTris缓冲溶液的条件下,L-脯氨酸脱氢酶酶活最高,为1.5U/mL。……   
[关键词]:超嗜热菌;His-tag;色素依存性L-脯氨酸脱氢酶;镍亲和色谱
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《北京化工大学学报(自然科学版)2010年06期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)