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日本对虾精巢和卵巢全长cDNA文库的构建

王艺磊;张子平

  采用RDP试剂提取日本对虾精巢和卵巢的总RNA ,经Oligotex试剂盒纯化得到mRNA。根据SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术 ,利用含SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一条链 ,利用含SfiⅠA酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一条链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,采用LDPCR引物合成双链cDNA ,双链cDNA用SfiⅠ酶切和过柱分级分离后 ,与λTriplEx2两臂进行连接 ,随后进行λ噬菌体体外包装反应 ,构建成精巢和卵巢之全长cDNA文库。构建好的文库中 ,精巢的文库含有约 10 4× 1 0 6的重组子 ,卵巢的文库含有约为 12× 1 0 6的重组子。文库扩增后 ,滴度分别达7 3× 1 0 8(Pfu ml)和 9 1× 1 0 8(Pfu ml) ,插入cDNA长度为 4 0 0bp~ 3kb ,说明两文库均具有良好的质量 ,为进一步筛选、克隆精巢与卵巢特异表达基因奠定了基础。……   
[关键词]:cDNA文库;精巢;卵巢;日本对虾
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《动物学杂志2003年02期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)