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用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因长片段

汪思应;郑红;程洁;余科科;许望翔;李俊

  目的 建立一种简便有效的获取cDNA大片段的实验技术。方法 应用PCR原理 ,设计特异引物结合文库载体引物对大鼠胎肝cDNA文库进行PCR扩增 ;用随机引物标记法标记已知小片段“目的基因”(30 0bp± )作为探针 ,对PCR产物进行Sorthern杂交以检验“目的基因”片段的正确性及长度 ;回收“目的基因”片段并连接入PGEM T载体 ,转染JM 10 9并扩增后 ,提取“目的基因”测序。结果 琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增产物有多条不同长度的段 ,Sorthern杂交发现一段长度为 1 5kb的cDNA片段为“目的基因” ;测序结果与GeneBank进行Blaste分析 ,该基因为一株新的序列 ,已在GeneBank中登录注册 (RatLiverRegeneration relatedPro tein 1,RLRP 1AF2 36 0 5 4 )。结论 应用PCR结合Sorthern杂交等手段可迅速从cDNA文库中获取长片段目的基因……   
[关键词]:基因;实验方法;PCR
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《安徽医药2003年01期
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