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烤烟烟叶胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶分离条件的优化

贾峰;魏庆华;杜铮;王彩霞;黄晓书;刘卫群

  通过不同流动相、测定温度、流速的对比,优化了分离烟叶总DNA中胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的高效液相色谱法。烤烟烟叶DNA采用CTAB法提取,高氯酸水解,用KOH调节pH到3~5,取上清液测定。色谱柱为Nuc leosil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)。优化后测定条件为:流动相采用甲醇∶5 mmol/L戊烷磺酸钠(10∶90,V/V),流速0.7 m l/m in,柱温30℃,检测波长273 nm,进样量20μl。该方法简化了流动相的配制,缩短了分离时间,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加标回收率分别为103.50%和96.67%,相对标准偏差为2.35%和2.80%。用该方法研究烤烟烟叶发育过程中总DNA胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,效果良好,符合烟叶生长发育规律。……   
[关键词]:反相高效液相色谱;烤烟烟叶;5-甲基胞嘧啶;胞嘧啶
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《山东农业科学2010年06期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)