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翅果油树植株再生体系的优化

刘庚伟

   濒危植物翅果油树的离体培养再生体系虽已初步建立,但还存在许多急需解决的问题,如芽苗玻璃化、培养物褐化、生根小苗叶片黄化易脱落、生根率低等,严重制约了在生产上的应用,进一步优化其植株再生体系,具有重要的实践意义。 本实验以濒危植物翅果油树无菌萌发的种子苗为材料,尤其以上胚轴为外植体,研究了培养基中附加生长素类物质NAA,细胞分裂素类物质6-BA、KT、ZT及GA3、PP333、AgNO3等对上胚轴不定芽分化、丛生芽增殖、小苗伸长的影响(器官型发生途径);此外,还重点研究了不同生长调节剂、培养条件和培养方式对小苗生根的影响,筛选出了较适宜的生根培养基,进一步优化了翅果油树快速繁殖再生体系,为进一步进行翅果油树遗传转化等的研究打下了一定基础。 主要培养程序及结果如下: 1、外植体的筛选:去掉坚硬中果皮和内果皮的种仁,经常规消毒处理后,接种于1/2MS培养基上,光下萌发30天后,从萌发的种子试管苗上截取上胚轴、下胚轴、叶柄、叶脉等外植体进行离体培养,结果表明:上胚轴为最佳外植体,不仅不定芽分化频率高(92.6%),而且再生小苗玻璃化、褐化程度低。 2、不定芽的分化:0.6cm长的上胚轴切段,接种在分化培养基上,进行一周的暗培养,可以减轻外植体的褐化程度;不同季节萌发的小苗上胚轴切段,接种在相同分化培养基上,不定芽分化频率及培养物褐化程度有明显不同,春季最佳。不同浓度的6-BA对于不定芽的分化有显著影响,浓度过高、过低都不利于不定芽的产生,以0.5mg/L最好。上胚轴分化不定芽的适宜条件:以MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+LH300mg/L+VitC150 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L为培养基,经暗培养一周后,置于光下培养,25天出现分化的不定芽。 3、不定芽的增殖与芽苗的伸长:不同浓度的6-BA与NAA组合使用对于不定芽的伸长有较大影响;降低6-BA浓度能有效减轻芽苗的玻璃化;添加0.2mg/L的GA3有利于不定芽的伸长,但苗较细弱;添加0.005mg/L、0.01mg/L的TDZ,芽数增多,但芽不易伸长;与对照相比,添加0.2mg/LAgNO3,对叶子的脱落与黄化,无明显效果。上胚轴分化的不定芽块切割成小块,接种在培养基上,MS+BA0.25mg/L+NAA0.05mg/L+LH300mg/L+ VitC150 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,20天后,增殖效果较好;上胚轴分化的不定芽转接在培养基上,MS+BA0.25mg/L+NAA0.125mg/L+LH300mg/L+VitC150mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,20天后,芽苗伸长效果较好。 4、生根培养:研究了1/2MS、2/3MS、1/2WPM、WPM四种基本培养基对小苗生长及生根的影响,结果表明:1/2MS较好。以后采用1/2MS为基本培养基,两种生根方式进行生根研究。一步生根法,2-3cm的小苗接种在培养基上,1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.02mg/L+ LH300mg/L+VitC150mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L,暗培养10天后,转移到光下培养,45天后生根率为50%;两步生根法,小苗用200mg/L的IBA溶液浸泡30min后,垂直插入培养基上,1/2MS+LH300mg/L+VitC150 mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L为培养基,暗培养7天后,转移到光下培养,45天后生根率为66.67%。……   
[关键词]:濒危植物翅果油树;上胚轴离体培养;植株再生体系;器官型途径;生根
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山西师范大学2010年