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抗新城疫病毒中药多糖的筛选

王春花

   新城疫(Newcastle disease, ND)是对养鸡业危害较严重的传染病之一,给养禽业造成了严重的经济损失。目前对于新城疫的治疗,缺乏有效的治疗药物。中药多糖具有增强免疫力、抗病毒等多效性作用,且具有低毒,低耐药性的特点,在治疗鸡新城疫疾病方面显示出巨大的潜力。 本试验选定8种含有多糖的中药为药效跟踪研究对象,对8种中药进行多糖提取、纯化多糖,采用氯磺酸-吡啶法对多糖进行硫酸化修饰,采用体外细胞培养法研究8种中药多糖抗新城病毒的活性;在此基础上,对具有抗病毒活性的大黄多糖提取工艺进行了深入研究,并通过凝胶层析法对大黄多糖进行分级,对多糖结构进行了初步测定,主要研究内容如下: 采用传统水提醇沉法提取8种中药的多糖成分,采用氯磺酸-吡啶法对8种多糖进行硫酸化修饰,在建立的鸡胚成纤维细胞筛选平台上,体外试验初步筛选出对新城疫病毒有抵抗作用的多糖,并且比较修饰前后抗病毒活性的变化。结果显示,8种多糖均具有一定抗病毒活性,以黄芪多糖效果最明显,当归多糖,板蓝根多糖次之,紫草及黄精多糖效果不显著。通过硫酸化修饰,提高了当归、牛膝及大黄多糖的抗病毒活性,表现强抗NDV作用 在单因素考察的基础上,正交设计试验优化超声法提取大黄多糖的条件,超声提取法的最优多糖提取参数为:pH值9.0,料液比1:40,温度40℃,时间50min。在该条件下大黄多糖提取率42.27%及多糖含量13.11%,与传统水提醇沉法提取大黄多糖法的提取率38.10%及多糖含量5.06%比较,超声法显著优于传统提取法,并且超声法更节能,高效,不易破坏多糖结构。用SephadexG-50及SephadexG-100凝胶对大黄多糖进行分子量分级得到单一洗脱峰,表明大黄多糖主要由一种多糖组成。 对大黄多糖及其修饰物进行紫外光谱分析,发现在190-220nm处均有一强吸收峰,表明检测样品为多糖类物质,硫酸化大黄多糖在265nm有明显的-SO3的特征吸收峰。通过硫酸钡明胶比浊法对氯磺酸-吡啶法修饰的大黄多糖进行S042-含量及取代度测定,通过稳定性试验确定反应后20min为最佳测定时间。硫酸化修饰的大黄多糖中S042-含量6.04%,SD为0.38,回收率为90%。 通过薄层色谱分析大黄多糖的单糖组成包括葡萄糖醛酸、葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖。通过红外光谱分析,硫酸化大黄多糖增加了1156.6cm-1、885.5cm-1和816.1cm-1的吸收峰,证明硫酸基已与多糖结合成酯,光谱分析说明大黄多糖具有吡喃糖苷,是一种含有糖醛酸的吡喃型多糖,由a-D-吡喃葡萄糖,β-D-吡喃葡萄糖,β-L-吡喃阿拉伯糖和a-D-吡喃半乳糖,葡萄糖醛酸及a-D-吡喃木糖组成。 本研究比较了多糖及硫酸酯化多糖抗新城疫病毒的活性,初步筛选出对新城疫病毒有抑制作用的多糖;优化了大黄多糖的提取条件,成功分级大黄多糖得到较均一组分,对主要组分结构进行了初步分析,为中药多糖及硫酸酯化多糖在临床预防和治疗新城疫疾病研究提供一定的理论基础。……   
[关键词]:中药多糖;硫酸化多糖;NDV;抗病毒;大黄多糖
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2010年
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