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还原型谷胱甘肽对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预作用

吕静

   目的:间质性肺疾病(Interstitial lung disease, ILD)包括一大组肺的弥漫性疾病,主要病变已非解剖学的肺间质,还包括肺泡上皮细胞、血管内皮细胞等肺实质,病变不仅限于肺泡壁,也可以波及细支气管。现在有的学者认为弥漫性实质性肺疾病(diffuse parenchymal lung disease, DPLD)更贴切一些[1]。博来霉素为抗肿瘤药物,已广泛应用于妇科肿瘤、淋巴瘤等化疗,约10%-23%的用药患者可出现肺毒性,表现为呼吸困难、咳嗽、胸痛、肺部罗音等,导致非特异性肺炎和肺纤维化,甚至快速死于肺纤维化。氧化、抗氧化失衡可能在疾病的进程中起重要作用。本试验旨在观察不同剂量还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预作用,并与传统药物糖皮质激素进行对照,通过测定血清中透明质酸(hyaluronan, HA)和Ⅲ型前胶原(typeⅢprocollagen, PCⅢ)的含量以及肺组织中肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α, TNF-α)表达水平探讨谷胱甘肽对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预作用。 方法:选取清洁级健康、雄性SD大鼠(河北医科大学实验动物中心提供)90只,体重220±10g,适应性饲养一周后,随机分成五组:(1)正常对照组(N组):18只,气管内注入0.1ml/100g生理盐水,假造模后第一天用生理盐水0.2ml/100g腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各处死6只。(2)模型组(A组):18只,气管内一次性注入博来霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用生理盐水0.2ml/100g腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各处死6只。(3)激素组(B组):18只,气管内一次性注入博来霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用地塞米松注射液0.5mg/kg腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各处死6只。(4)谷胱甘肽小剂量组(C组):18只,气管内一次性注入博来霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用谷胱甘肽0.1g/kg腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各处死6只。(5)谷胱甘肽大剂量组(D组):18只,气管内一次性注入博来霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用谷胱甘肽0.4g/kg腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各处死6只。各组处死前剪断腹主动、静脉取血,用放射免疫方法测定血清中HA、PCⅢ,然后将右肺离断后取右中叶由10%福尔马林固定,用免疫组化方法检测TNF-α,并用图像分析系统测定TNF-α的平均灰度值,通过苏木精-伊红(HE)染色、Masson胶原染色来评价治疗效果,肺泡炎及肺纤维化程度按照Szapiel法分为4级(1分:无肺泡炎或无纤维化;4分:重度肺泡炎或纤维化,受累面积>50%) 结果: 1肺组织病理分析结果:A组模型组同一时间点肺泡炎程度显著高于N组正常对照组(P<0.01),A组14天、28天肺纤维化程度均显著高于N组(P<0.01),表明动物模型复制成功。B组激素组和C组谷胱甘肽小剂量组肺泡炎及纤维化程度均较模型组减轻,B7、C7肺泡炎程度均较A7显著减轻(P<0.01),B14、C14肺泡炎程度均较A14显著减轻(P<0.05),B28、C28纤维化程度均较A28显著减轻(P<0.05),但两者间无统计学差异(P>0.05)。D组同一时间点肺泡炎及肺纤维化程度较B组减轻,但无统计学差异(P>0.05)。 2血清中HA含量变化:与N组比较,A组模型组、B组激素组、C组谷胱甘肽小剂量组、D组谷胱甘肽大剂量组大鼠血清中HA水平在造模后第7、14天均明显升高,有统计学差异(P<0.01),造模后第28天时A组、B组均有统计学性差异(P<0.01),谷胱甘肽各组无统计学差异(P>0.05);与A组比较,造模后第7天, B组激素组、谷胱甘肽各组有统计学差异(P<0.01),造模后第14、28天仅谷胱甘肽各组有统计学差异(P<0.01);干预组各组比较,同一时间点B组与谷胱甘肽各组有统计学差异(P<0.01),但谷胱甘肽各组之间无统计学差异(P>0.05)。 3血清中PCⅢ含量变化:与N组比较,A组模型组大鼠血清中PCⅢ水平在造模后第7、14天均升高,第14天达高峰,随后下降,有显著的统计学差异(P<0.01),第28天时有统计学差异(P<0.05);与A组比较,造模后各时间点B组激素组、谷胱甘肽各组均有统计学差异(P<0.05);干预组各组比较,同一时间点B组与谷胱甘肽各组无统计学差异(P>0.05),谷胱甘肽各组之间亦无统计学差异(P>0.05)。 4肺组织TNF-α含量变化:A组模型组大鼠肺组织TNF-α含量随造模时间延长逐渐升高,第7、14、28天时明显高于N组(P<0.01),第28天达高峰;干预组各组大鼠TNF-α呈低水平升高趋势,升高幅度显著减慢,造模后第7、14、28天TNF-α含量均显著低于A组(P<0.01)。B组激素组与谷胱甘肽各组同一时间点TNF-α含量无统计学差异(P>0.05),谷胱甘肽各组比较无统计学差异(P>0.05)。造模后第7天,D组谷胱甘肽大剂量组的TNF-α含量与N组比较无统计学差异(P>0.05)。 结论: 1还原型谷胱甘肽早期应用可以预防肺纤维化的发展,减轻博来霉素诱发的肺纤维化的炎症。 2肺纤维化大鼠应用大剂量谷胱甘肽腹腔注射未发现不良反应,并且未出现激素的副作用。 3还原型谷胱甘肽对肺纤维化的作用可能与其早期抗氧化减轻炎症有关。……   
[关键词]:间质性肺疾病;博来霉素;还原型谷胱甘肽;透明质酸;Ⅲ型前胶原;肿瘤坏死因子-α
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北医科大学2010年