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黄粉虫幼虫抗菌肽诱导方法及其抗菌活性的研究

董杰超

   本试验选择黄粉虫幼虫(Tenebrio motitor Linnaeus)为研究材料,对抗菌肽的诱导因素、各因素的诱导水平、提取时间、多因素复合诱导以及对多种病原菌的抑菌效果、持续时间、抑菌机理等方面进行了研究,同时还进行了不同诱导因素所诱导的抗菌肽组分的电泳试验。为黄粉虫抗菌肽的开发与利用提供参考。试验结果如下: 1.大肠杆菌、超声波与紫外光诱导处理后,黄粉虫幼虫都能产生不同抗菌活性的抗菌肽。试验以大肠杆菌作为指示菌,采用抑菌圈法测定黄粉虫幼虫抗菌肽的活性。结果表明,经3种诱导因素在5个水平下处理后,黄粉虫幼虫抗菌物质的活性随各因素诱导水平的升高而增大,产抗菌肽的时间动态都呈现先增加再下降的变化趋势,峰值出现在诱导后3-5 d。不同诱导源诱导结果有所不同,经大肠杆菌诱导后,峰值随诱导浓度的增大而提前,超声波与紫外光诱导后峰值出现时间基本无变化。3个诱导因素处理后,黄粉虫幼虫的死亡率都随诱导水平的增大而增加。 2.采用3因素5水平的正交旋转组合设计,以大肠杆菌浓度、超声波处理时间、紫外光处理时间为参试因素,黄粉虫幼虫抗菌肽产率(抑菌圈直径×存活率)为目标函数,得到拟合度较好的二次回归方程:Y=2.0611-2.4559×10-19×Z12+1.6524×103×Z22 +3.0030×10-3×Z32+1.2776×10-9×Z1-6.5769×10-2×Z2- 7.174910-2×Z3-3.2568×10-11×Z1Z2-3.2087×10-11×Z1Z3, F险验表明,大肠杆菌浓度对抗菌活性有极显著影响,超声波与紫外光则无显著影响。诱导方法优化组合方案为:大肠杆菌诱导浓度1.47.4.06×108个/mL,超声波处理时间18.3-21.8 min,紫外光处理时间10.7-13.6 min。 3.电泳试验结果表明,与未处理的血淋巴样品相比,经大肠杆菌、超声波与紫外光诱导后,黄粉虫幼虫血淋巴在18、21、24与90 KD处增加条带,55与36 KD条带变浓,70 KD条带变淡,不同诱导源诱导后的蛋白质条带变化基本一致。 4.本试验选择了8种病原菌测定黄粉虫幼虫抗菌肽的抑菌谱,2种革兰氏阳性细菌中,黄粉虫幼虫抗菌肽只对链球菌有杀菌与抑菌效果,对金黄色葡萄球菌无明显的抑菌效果。6种革兰氏阴性细菌中,黄粉虫幼虫抗菌肽对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、枯草芽孢杆菌、番茄青枯病菌均有杀菌与抑菌效果;对水稻白叶枯病主要为抑菌效果;对铜绿假单胞菌无显著的抑菌效果。结果表明:黄粉虫幼虫抗菌肽具有较广泛的抗菌谱,但对个别细菌无明显的抑菌效果。……   
[关键词]:黄粉虫幼虫;诱导;抗菌肽;抑菌活性;SDS-PAGE电泳
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2010年