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小鼠—大鼠异种心脏移植miRNA表达谱分析

李川

   目的研究小鼠-大鼠异种异位心脏移植后供心miRNA表达谱的变化,为有效控制异种移植排斥反应奠定实验基础。 方法 1.采用改良Heron套袖法建立小鼠-小鼠/大鼠异位心脏移植模型,将小鼠心脏移植到受体右侧颈部。实验动物包括同系对照组、异种24h组和异种停跳组,每组含受体动物8只。 2.试剂盒法分离提取RNA, Cy5标记所提取总RNA中的miRNA,浓缩标记样品进行miRNA芯片杂交,使用Axon GenePix 4000B Microarray Scanner进行图像扫描,筛选出异种心脏移植排斥反应中差异表达显著的miRNA。 3. TargetScan软件预测差异表达显著的miRNA靶基因,寻找与异种移植排斥反应发生相关的基因。 4.选取杂交结果中差异表达显著的miR-146a、miR-155和miR-451进行相对定量研究,通过TaqMan miRNA Assays技术对三组样本进行检测,验证芯片结果。 结果 1.模型建立练习阶段、稳定阶段和成熟阶段手术成功率分别为53.33%、85.71%和92.31%,3个阶段手术成功率相比较具有统计学差异且后两阶段成功率高于练习阶段。 2.异种24h组和对照组芯片杂交结果显示24个miRNA差异表达显著,其中11个表达显著下调,13个表达显著上调。 3.异种停跳组和对照组芯片杂交结果显示25个miRNA差异表达显著,其中12个表达显著下调,13个表达显著上调。 4.异种停跳组和异种24h组芯片杂交结果显示6个miRNA差异表达显著,其中5个miRNA变化趋势一致,1个miRNA变化趋势相反。 5.芯片杂交结果中差异表达显著的miR-146a、miR-155和miR-451进行相对定量研究,与对照组相比较结果具有统计学差异,且3个miRNA的变化倍数符合芯片分析的结果。 结论 1.采用改良Heron套袖法建立小鼠-小鼠/大鼠异位心脏移植模型,此方法操作简便、易于掌握,是研究异种心脏移植排斥反应的良好动物模型。 2.在异种心脏移植排斥反应中出现多个miRNA显著的差异表达,涉及免疫、肿瘤的发生、胰岛素的合成与代谢、神经系统生理功能、细胞增殖、血管生成等多个方面,并广泛参与基因的转录调控。 3.在小鼠-大鼠异种心脏移植排斥反应中miR-146a和miR-155同时出现高表达,miR-451出现显著低表达,说明它们参与了免疫应答和炎症反应的调控,提示miRNA在异种心脏移植排斥反应中可能发挥着重要的调控作用。 4.微阵列芯片技术是有效的高通量分析心脏异种移植排斥反应miRNA差异表达的研究手段。……   
[关键词]:异种心脏移植;排斥反应;miRNA;芯片;表达谱;实时定量PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:天津医科大学2010年
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