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pcDNA3.1-preS1-GFP重组质粒的构建及其在小鼠精子内的表达

李茜

   目的构建含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV) preS1基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-preS1-GFP,观察并检测该重组质粒在小鼠精子内的表达。 方法采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)方法,以pBR322-HBV质粒为模板扩增HBV preSl基因片段,将PCR扩增得到的HBV preSl基因片段与含有GFP的真核表达载体pcDNA3.1-GFP分别进行EcoR I和Xba I双酶切,以T4连接酶过夜连接,经酶切及测序鉴定后,用脂质体LipofectamineTM2000转染小鼠精子,在荧光显微镜下观察GFP有无表达,并应用PCR检测HBV preS1基因的存在。 结果①利用DNA重组技术将preS1基因插入到pcDNA3.1-GFP质粒中,经双酶切及测序鉴定,成功构建了pcDNA3.1-preS1-GFP真核表达载体;②将重组质粒按一定比例转染小鼠精子后,在荧光显微镜下观察到转染精子头部有较明亮的绿色荧光;③提取转染精子DNA,经PCR扩增得到位于HBV preSl基因区域内长约589bp的片段,与预期一致。 结论①以上研究结果证实,重组质粒pcDNA3.1-preS1-GFP已得到成功构建,这为建立新型HBV垂直传递小鼠模型提供了可能;②重组真核表达载体pcDNA3.1-preS1-GFP在小鼠精子内的表达,表明重组质粒pcDNA3.1-preS1-GFP可用于制备转基因小鼠,同时GFP还可作为HBVpreS1基因存在与否的报告基因。因此本研究为建立新的HBV垂直传递小鼠模型,进而更好地研究HBV的垂直传播机制奠定了实验基础。……   
[关键词]:乙型肝炎病毒;重组质粒;绿色荧光蛋白;小鼠精子;转染
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:青岛大学2010年