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载Harpin_(Xooc)蛋白纳米粒的研制及生物活性测定

湛江

   HarpinXooc蛋白是由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola) hrf2基因编码的蛋白质,具有Harpin蛋白家族的特征:能够诱导非寄主植物过敏性反应和抗病性。Harpin蛋白被应用于烟草、水稻等多种作物上,能够促进植物生长和提高作物产量,显示出良好的生物学效果。本实验旨在研制载HarpinXooc蛋白纳米粒,优化其制备条件,初步分析其生物活性,为其进一步应用奠定基础。为了获得高纯度的HarpinXooc蛋白,我们利用His融合基因系统对HarpinXooc蛋白进行纯化,分析his-HarpinXooc蛋白的产量、等电点和生物活性。采用本实验室已构建的大肠杆菌工程菌BL21/pET30a(+)-hrf2表达his-HarpinXooc蛋白,使用HisTrap HP Kit纯化,并对纯化条件进行优化,每升菌液可获得高纯度的his-HarpinXooc蛋白20 mg,经测定其等电点约为4.7。本实验纯化所得his-HarpinXooc蛋白与不含his标签的纯HarpinXooc性质一致,具有Harpin蛋白的典型特征,能够诱导烟草产生过敏性反应,为his-HarpinXooc蛋白的应用奠定基础。 实验利用静电聚合原理,以壳聚糖为载体,多聚磷酸钠为交联剂制备载HarpinXooc纳米粒,测定其粒径、电位、包封率、载药量和释放情况,考察振荡时间、pH值、蛋白浓度、壳聚糖(CS, Chitosan)与多聚磷酸钠(Sodium tripolyphosphate, TPP)质量比对纳米粒的影响。结果显示,载HarpinXooc纳米粒形态均一,粒径、zeta电位、包封率、载药量和释放量分别随pH值、CS与TPP质量比和蛋白浓度的变化而呈现有规律的变化。在pH=6.3,CS浓度为800μg/mL,TPP浓度为80μg/mL的条件下研制载HarpinXooc蛋白纳米粒制备条件缓和、工艺简单、包封率较高,具有缓释效应,生物活性好,能够诱导烟草产生过敏性反应和更好地促进植物生长。但纳米粒的zeta电位和稳定性等仍需做进一步分析,以期将其制成新型的纳米制剂。本研究为纳米粒在农业领域的应用提供更好更全面的理论依据。……   
[关键词]:Harpin_(Xooc)蛋白;纯化;纳米粒;理化性质;生物活性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2009年