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东方山羊豆4香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)基因的克隆与表达研究

杨冬梅

   东方山羊豆(Galega orientalis L.)是20世纪末引种到我国的牧草品种,为发掘其基因资源,本实验克隆出东方山羊豆4CL基因,探索其在东方山羊豆体内的表达,研究4CL基因对东方山羊豆抗逆性的影响,为今后东方山羊豆在我国的种植和应用奠定基础。 本研究取得以下成果: 1、获得目的基因的全长序列 采用RACE技术结合RT-PCR方法从东方山羊豆中获得编码4CL基因的cDNA全长序列,命名为Go4CL。该序列全长1916bp,开放阅读框1653bp,编码510个氨基酸。序列分析表明:Go4CL基因编码的蛋白含4CL类蛋白特异的AMP-binding保守结构域LPYSSGTTGLPK和催化活化中心GEICIRG。同时该基因编码的蛋白与其他同源蛋白序列有较高相似性。 2、Go4CL基因的表达特性 利用Real-Time PCR方法检测发现,Go4CL基因在东方山羊豆的根中表达量最高,叶中表达量最少。在PEG、ABA、MeJA、SA胁迫处理下Go4CL基因的表达量均有不同程度的上调,说明此基因在植物抵御干旱、病菌侵袭和机械损伤等胁迫过程中能够起到调控作用。 3、表达载体的构建及转基因研究 成功构建了东方山羊豆Go4CL基因的正义表达载体和反义表达载体,为今后调控Go4CL基因在植物体内的表达量,培育出抗性强、木质素含量适中的更为优质的东方山羊豆材料奠定基础。通过农杆菌侵染法将Go4CL基因正义表达载体转化烟草,获得了T0代转基因植株,通过PCR对转基因烟草进行检测,获得了4CL增强表达转基因T0代株系。在17株T0代阳性小苗中,有13株小苗PCR检测为阳性,转化率约为77%。……   
[关键词]:东方山羊豆;4香豆酸;辅酶A连接酶;RACE;荧光定量PCR;正义表达载体;反义表达载体
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业科学院2010年