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基于DnaE内含肽的定量检测GPCRs内吞方法的建立

张亚萍

   G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs)家族参与了机体内多种生理过程的调节,是治疗多种人类疾病的主要药物靶点。检测非G蛋白亚基依赖的G蛋白偶联受体的内吞可用于研究受体激动剂的活性。本论文首先从蓝细菌克隆到新的DnaE内含肽并鉴定其自我剪接功能;此后我们建立了一种新型的定量分析GPCRs内吞的方法,该方法基于Npu-DnaE内含肽介导的蛋白剪接而重组断裂Renilla荧光素酶活性和被配体活化的受体与β-arrestins2之间的相互作用。试验检测了4个功能差异(即偶联不同亚型G蛋白)的G蛋白偶联受体:昆虫脂动激素受体(AKHR)、人源烟酸受体(HM74a)、人源大麻受体2(CB2)、人源组胺受体1(H1)的内吞作用,结果所得的已知激动剂或拮抗剂引起相应受体内吞的EC_(50)或IC_(50)值与文献一致,充分证明了该方法的可行性与灵敏性。其方便快速、灵敏定量的特性可进一步用于细胞水平上G蛋白偶联受体的功能筛选,为高通量药物筛选领域注入新的力量。……   
[关键词]:G蛋白偶联受体;定量内吞;功能筛选;DnaE内含肽;荧光素酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2010年
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