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葡萄病毒A多克隆抗体的制备及检测效果分析

李勇

   葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)是葡萄上普遍发生的一种病毒,在世界各地的葡萄种植园区都有分布,侵染葡萄后在木质部上形成茎沟槽,造成产量下降,品质降低,成熟延迟,树势衰退,经济寿命缩短。由于目前尚无理想的化学药剂来防治病毒病,因此栽培无病毒苗木是防治病毒病的有效途径,而病毒检测能够为培育和繁殖无病毒苗木提供良好的技术支撑。本研究主要是利用意大利提供的GVA毒源材料在本氏烟上进行扩繁,进而利用扩繁得到的材料提取病毒粒子,最后将提取的病毒粒子通过免疫大耳白兔获得葡萄病毒A多克隆抗血清。取得的主要研究成果如下: 1、通过汁液摩擦接种法将GVA毒源材料接种到草本寄主本氏烟上,然后利用活化了的毒源材料进行转接,转接5-7d后可在本氏烟叶片上产生明显的褪绿、皱缩、畸形等症状。利用扩繁得到的材料提取病毒粒子,采用的方法主要是差速离心结合蔗糖密度梯度离心,将病毒提纯液经SDS-PAGE电泳检测后,结果表明其在23KDa处产生明显的蛋白质分子条带。 2、将得到的病毒提纯液经磷钨酸负染后进行电镜观察,结果表明在电镜下可看到大量线状病毒粒子的存在,大小约为800nm。使用市售GVA的多克隆抗体对病毒提纯液进行Western blot分析,结果表明在23KDa处市售GVA的多克隆抗体与病毒提纯液产生信号较强的特异性反应。通过将得到的病毒提纯液免疫大耳白兔,获得了效价为1:6400的多克隆抗血清。 3、对所制备的多克隆抗血清进行Western blot分析,结果表明本实验所制备的多克隆抗血清与病毒提纯液在23KDa处也可产生信号较强的特异性反应。利用制备的多克隆抗血清对温室保存的5个带有GVA的葡萄样品进行血清学检测分析,采用的方法主要是ID-ELISA和PAS-ELISA。结果表明,本实验所制备的多克隆抗体能够在这5个葡萄样品上检测到GVA的存在。……   
[关键词]:葡萄病毒A;病毒提纯;多克隆抗体;ELISA
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2009年