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蒙古黄芪的组织培养

韩静

   黄芪(Radix Astragali)是豆科(Leguminosae)蝶形花亚科(Papilionoideae)多年生草本植物,具有很高的药用价值和经济价值。但由于近年来的过度采挖,致使野生黄芪资源几近枯竭,不能满足市场的需要,所以离体培养已成为增加黄芪产量的主要手段之一。本文以购自甘肃省陇西县的优质蒙古黄芪种子为材料,通过组织培养的方法建立其快速繁殖体系。 蒙古黄芪快速繁殖体系的建立,主要是针对种子的消毒和萌发、外植体的筛选、愈伤组织初代诱导培养基、继代增殖培养基和生根培养基的选择,以及褐化现象的抑制进行的。 种子的消毒和萌发率的高低对于无菌条件下获得外植体是很重要的。将蒙古黄芪种子浸泡在适量洗洁精10min中后,再依次进行45s中75%的酒精浸泡和9.5min0.1%的升汞消毒,其萌发率可达100%,且不发生任何污染现象;另外,在低温中存放半年和一年后的种子若经过萌发前蒸馏水中10h的浸泡预处理,其萌发率可有大幅度提高,达到100%。 分别以蒙古黄芪的子叶、下胚轴和胚根作为外植体诱导愈伤组织。结果发现,在分别添加了NAA、2,4-D及6-BA的单一植物激素的MS培养基中,子叶均不能诱导出愈伤组织,而下胚轴在NAA为1.0mg/L时诱导率可达70%;在添加了不同生长素和细胞分裂素组合的培养基中,子叶诱导的愈伤组织褐化程度较轻,但诱导率均较低,而胚根的诱导率虽高于子叶,但褐化严重,只有下胚轴的诱导率最高,可达100%,虽仍有褐化现象发生但生长旺盛。所以,下胚轴是诱导蒙古黄芪愈伤组织的最佳外植体。 培养基中的激素种类与浓度配比是影响蒙古黄芪初代培养、继代增殖及生根培养的重要因素。其中,愈伤组织的最佳初代诱导培养基是:MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/L NAA。在此激素中,愈伤组织诱导率可达到100%;而继代中仍可以此浓度来进行增殖培养,这样不仅可使愈伤组织达到较好的生长效果而且还具有较高的增殖量。另外,在继代培养时愈伤组织易发生褐化,当用单一防褐剂对其进行抑制时,活性炭(AC)的作用不明显,而一定浓度的Vc对愈伤组织的褐化则起到了较明显的抑制效果;因而进一步通过正交试验对综合因素抑制褐化的效果做了对比,得出当培养基中添加0.1mg/L Vc,前3天进行暗培养,其余几天进行光培养(10h/d),10天后继代时,其褐化得到了较好的控制。在生根培养中,1/2MS+2.0mg/L NAA为最适生根培养基,其中诱导生根率可达到83.3%,若再向培养基中添加0.3%的活性炭(AC)时,则生根数量更多。 通过对蒙古黄芪愈伤组织总的生长趋势进行测定,发现即使按照所有筛选出的最适条件进行培养,愈伤组织的最佳生长旺盛期(即具有最大的增殖率、最佳的生长状态并无褐化现象的发生)只能稳定在3、4代左右,若继续进行增殖培养,则长势逐渐变缓,且伴有褐化现象的发生。……   
[关键词]:蒙古黄芪;组织培养;愈伤组织;褐化抑制
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北师范大学2009年