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重组猪α干扰素抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的应用研究

王丹

   利用本实验室成功构建的猪α干扰素原核达载体PETIFN-α,在大肠杆菌BL21中表达了猪α干扰素,表达产物为一融合蛋白。SDS-PAGE电泳后在约40.2 kDa处出现一条带,同预期结果一致。经过优化IPTG的浓度和诱导时间,猪α干扰素的表达量明显提高,表达量约占细菌总蛋白量的20%。应用镍琼脂糖凝胶树脂层析柱吸附纯化猪α干扰素融合蛋白,不同浓度咪唑缓冲液洗脱吸附蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定表明,400mM咪唑的缓冲液洗脱的猪α干扰素蛋白,纯度最高,达到蛋白纯化的预期目的,可以用于抗病毒活性试验。 用细胞病变抑制法在Marc-145细胞上测定重组猪α干扰素活性,测定重组猪α干扰素抗PRRSV的病毒活性为5.0×103U/mg。将干扰素做不同浓度梯度稀释后,在单层Marc-145细胞上做猪α干扰素抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒试验,测得干扰素对Marc-145细胞的无毒浓度为0.20mg/ml,最小抑制浓度为0.14mg/ml。结果表明,重组猪α干扰素在体外对PRRSV有较低的抑制作用。 重组猪α干扰素体内抑制PRRSV试验研究表明,使用重组干扰素配合抗生素可以治疗猪病毒病,缩短治疗疗程2-3 d,治愈率高于不含干扰素的药物治疗组但差异不显著,使用干扰素治疗,停药后不易复发。干扰素的预防试验结果表明,与对照Ⅱ组相比,在断奶后第14天,健康仔猪断奶应激造成的腹泻率降低。……   
[关键词]:猪α干扰素;大肠杆菌;表达;细胞病变抑制试验;体外抑制PRRSV试验;体内抑制PRRSV试验
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河南农业大学2009年