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经不同途径移植骨髓间充质干细胞对大鼠急性心肌梗死的影响

章敬水

   目的:观察经不同途径移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对急性心肌梗死大鼠心功能、心肌梗死面积、毛细血管密度的影响,比较经静脉和心肌内联合移植MSCs是否比单用其中一种途径移植效果更好。 方法:①取雄性SD大鼠,体重80~100g,腹腔麻醉后处死,无菌条件下剥离股骨和胫骨,提取骨髓细胞,置于含10%胎牛血清的培养液中培养。通过不断换液去除非贴壁生长细胞,细胞长到80%融合时消化传代。收集第4代MSCs,消化洗涤后加入无菌4,6二脒基-2-苯吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole ,DAPI) ,终浓度为50mg/L,37℃孵育30分钟,PBS反复洗涤6次,除去未结合的DAPI,离心收集细胞,用无血清培养液制成细胞悬液,终浓度为2.5×107/ml,1小时内准备进行细胞移植。②把90只清洁雄性SD大鼠,体重(200±20)g,随机为A组(静脉移植组)、B组(静脉移植对照组)、C组(心肌内移植组)、D组(心肌内移植对照组)、E组(联合移植组)和F组(联合移植对照组),每组15只。结扎左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死梗型。A组大鼠于急性心肌梗死后24小时经尾静脉注射细胞悬液200ul,C组于急性心肌梗死后1周经心肌内注射细胞悬液200ul,E组于急性心肌梗死后24小时及1周分别经尾静脉和心肌内注射细胞悬液200ul;B、D和F三对照组以上述同样方法在相应时间注入不含MSCs的等量培养液。③大鼠急性心肌梗死后4周,测定心功能后处死大鼠,观察DAPI标记阳性细胞在心、肝、脾、肾、肺分布情况。行病理学研究,计算心肌梗死面积和毛细血管密度。 结果:①D组和F组分别有2只大鼠死亡,其余大鼠均存活至实验终点。②与B组、D组和F组相比,A组、C组和E组的心肌梗死面积缩小,毛细血管密度增加,左心室舒张末压(LVEDP)下降,左心室收缩压(LVSP)、左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)明显增高(P<0.05)。③A组、C组与E组间心肌梗死面积无明显差异(P>0.05)。与A组和C组比较,E组毛细血管密度增加,LVEDP下降,LVSP、±dp/dtmax增高更加明显(P<0.05),但A组与C组间无显著性差异(P>0.05)。④A组、C组和E组大鼠梗死心肌内均可见有DAPI标记阳性细胞,但肝、脾、肾、肺内均未发现。所有大鼠心、肝、脾、肾、肺内均未发现肿瘤及栓塞形成。 结论:经静脉、心肌内或二者联合移植MSCs均能改善急性心肌梗死大鼠心功能、增加毛细血管密度,但经静脉与经心肌内移植改善作用无明显差异,经静脉和心肌内联合移植较单用一种途径移植改善作用更好。经静脉、心肌内或二者联合移植MSCs均可缩小心肌梗死面积,但在缩小心肌梗死面积方面无明显差异。……   
[关键词]:骨髓间充质干细胞;干细胞移植;急性心肌梗死
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽医科大学2009年