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鹅TSH-β基因的克隆、序列分析及其多态性与产蛋性能的关联性

于金成

   光周期对禽类季节性繁殖起调控作用,促甲状腺激素(TSH)是启动禽类光周期反应的重要因子,β亚基决定其生物活性。本研究以扬州鹅为实验素材,首次克隆鹅TSH-β基因的全部序列,为进一步研究TSH影响鹅产蛋性能的分子机理提供第一手资料,同时寻找与扬州鹅产蛋性状的TSH-β基因多态位点,为鹅蛋用性状的分子标记辅助选择提供可参考的材料。结果如下: 1.首次在基因组水平上成功克隆了鹅TSH-β基因,共2420bp的序列,分别为200bp的5’侧翼区,65bp的外显子1, 876bp的内含子1,163bp的外显子2, 782bp的内含子2, 324bp的外显子3以及10bp的3’侧翼区。同时,在5’侧翼区定位了2个TATA框,2个垂体特异转录因子1结合位点,1个激活蛋白结合位点和1个转录因子结合位点等。所得序列均已上传至genbank,基因登录号分别为EU925400、EU939683、FJ393275和FJ797681。 2.序列比对发现,鹅TSH-β基因的外显子1与鸭、朱鹭的同源性是100%和95%,外显子2与鸭、朱鹭、鸡、鹌鹑、斑雀的分别为98%、96%、95%、92%和92%,外显子3的分别为96%、93%、93%、90%和88%;内含子1与朱鹭、鸡的同源性分别为85%、77%,内含子2与朱鹭、鸡、斑雀的同源性分别达到75%、74%和60%。同时,推测出的蛋白序列与鸭、朱鹭、鸡、鹌鹑、斑雀等的同源性分别达到99%、97%、96%、96%和94%。 3.根据鹅TSH-β基因设计了4对引物,采用PCR-SSCP技术进行了多态性检测,并对其与46只扬州鹅产蛋性能的关联性进行分析。结果显示:(1)引物I2检测出多态现象,DNA直接测序后显示,在intron2的第205到212位之间存在AACAACAGTGAATTCTGTGG或AGTTTAT两种序列,形成AA、AB、和BB三种基因型,等位基因A和B的基因频率分别为0.6596和0.3404。(2)经最小二乘分析,BB型群体在一个产蛋周期内的平均产蛋量显著高于AA型(P<0.05),AB型产蛋量明显高于AA型的(P=0.076)。三种基因型之间在开产日龄上差异不显著(P>0.05),但BB型早于AB和AA型。……   
[关键词]:;促甲状腺激素β基因;克隆;序列分析;PCR-SSCP;产蛋性能
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:扬州大学2009年