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小叶满江红内生菌多样性的T-RFLP分析

王瑾

   满江红(Azolla spp.)又俗称红萍、绿萍,是满江红科满江红属的水生蕨类植物,其叶腔内常有蓝藻与其共生,有较强的固氮能力。在我国广泛用作稻田绿肥和饲料。植物内生菌指生活史中某一阶段或全部阶段生活在植物组织内,对植物没有引起明显病害症状的一类微生物。自1964年Grilli通过电子显微镜观察,最早描述红萍内共生菌的存在以来,红萍内生菌的研究就快速发展起来。随着科学的进步和相互渗透,许多先进的科学技术手段运用到植物内生菌的研究中,使得内生菌的研究更加趋于合理和客观。T-RFLP技术是近年来发展起来的不依赖于培养的微生物群落多样性的分析方法之一。本文以无藻小叶萍为材料,利用T-RFLP技术对其内生细菌、真菌、古细菌的群落结构进行了研究,结合传统平板培养方法,比较全面、系统地揭示了小叶萍中内生菌的表型多态性和遗传多样性,为阐明内生菌在红萍-蓝藻共生体的系统发育和协同进化中的作用提供科学依据。 本研究采用CTAB法直接从植物组织中抽提包括内生菌DNA在内的总DNA,并用密度梯度离心法获得小叶萍内生菌菌群,对总DNA和菌群分别进行PCR扩增和平板培养。以细菌、古细菌的16S rDNA、真菌的ITS序列为靶基因,使用荧光引物进行PCR扩增,得到目的条带。分别对其PCR产物进行HhaI和MspI的酶切消化,T-RFs使用GeneMarker?软件处理。经RDP数据库比对发现了10种细菌和97种古细菌,同时也证明了内生真菌的存在。传统的平板培养方法对小叶萍组织中的内生菌进行分离培养,得到的菌株分离结果从细胞水平显示了内生菌的表型多态性。 根据T-RFs分析和比对的结果,可以认为小叶萍内存在着包括以细菌、古细菌、真菌群落为主的复杂微生物体系。本文首次在红萍内发现除细菌以外的微生物——古细菌、真菌的存在,在红萍内生菌多样性的研究上取得了重大突破。……   
[关键词]:红萍;内生菌;多样性;T-RFLP
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2009年