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水貂杯状病毒分离鉴定与生物学特性研究

徐贵财

   从发病水貂分离得到一株病毒,通过分离培养、理化鉴定、生物学与分子生物学方法确定该病毒为水貂杯状病毒(MCV)。2007年7月大连地区某水貂养殖场水貂发病,临床主要表现为眼睑分泌物增多,鼻镜干燥等症状,个别病例有死亡发生,剖检发现,表现为出血性肺炎。采集发病水貂肺脏、心脏、血液、肝脏、肾脏、脾脏、脑和鼻拭子标本,研磨后接种Vero-E6细胞,通过细胞连续传代培养,肺脏研磨液接种的细胞出现典型病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后从细胞瓶壁脱落,表明有病毒生长。生长病毒的细胞反复冻融三次后收集备用,分别做相关鉴定及生物学特性试验。该病毒能够在Vero- E6、Marc-145和BHK-21上生长,并产生特异细胞病变效应( CPE);该病毒不能够在鸡胚上生长;氯仿敏感试验、乙醚敏感试验、脱氧胆盐敏感试验表明,对脂溶性试剂不敏感;电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有杯状衣壳,呈正二十面体对称;该病毒对5-氟脱氧尿嘧啶核糖核苷(FUDR)不敏感,证明该病毒为RNA病毒;该病毒能够耐受pH3.0酸性环境,不能耐受pH10.0的环境;50℃水浴1h病毒不丧失感染能力;该病毒能够凝集人“O”型红细胞,不能凝集鸡、鹅、兔、猪、牛、山羊、绵羊、犬、大鼠、豚鼠的红细胞;紫外线灭活照射1h能够彻底灭活病毒,上述结果初步表明该病毒属于杯状病毒科(Caliciviridae)。根据杯状病毒特异性引物(DL1、DL2)进行反转录-聚合酶链式反应( RT-PCR),扩增得到331bp预期大小的目的片段。测序结果与GenBank上收录的11株杯状病毒科核苷酸序列进行BLAST比对,并利用DNAStar、BioEdit序列分析软件进行序列同源性分析,并绘制系统发育树。结果显示该病毒与1980年美国分离的3株水貂杯状病毒核苷酸序列( AF338405、AF338406、AF338407)同源关系最近,达93.5%~96.8%,氨基酸同源性为91.3%~97.1%。上述结果证明分离病毒为水貂杯状病毒,并命名为水貂杯状病毒DL-07株。……   
[关键词]:水貂杯状病毒;分离;鉴定;生物学特性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业科学院2009年