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前哨淋巴结检测及肿瘤—睾丸抗原表达与喉鳞癌侵袭转移的相关研究

程艳

   第一部分前哨淋巴结检测对喉癌治疗的临床应用价值 目的分析~(99m)锝-硫胶体(Technetium sulfur colloid,~(99)Tc~m-SC)显像的核素法、术中蓝染法以及核素法与蓝染法结合的联合法对喉癌前哨淋巴结(Sentinel Lymph Nodes,SLN)检测率,探索有效的喉癌SLN的检测方法;了解不同类型喉癌的SLN的分布特征,为cN_0期喉癌的颈淋巴结治疗提供依据。研究~(18)F-氟代脱氧葡萄糖(~(18)F-fluorodeoxyglucose,~(18)F-FDG)SPECT-CT显像对喉癌原发肿瘤的诊断、临床分期、颈部淋巴结转移的临床价值。 方法41例cN_0喉癌患者术前使用软性内镜喷洒管在肿瘤周围注射~(99)Tc~m-SC,进行SLN显像。注射~(99)Tc~m-SC后每15分钟进行平面显像和SPECT-CT显像直到SLN显影。手术中在注射~(99)Tc~m-SC的部位注射亚甲蓝,并用γ探针探测放射性“热点”。将手术切除的SLN及颈清扫标本行送病理检查。另外,5例喉癌患者术前行~(18)F-FDG SPECT-CT显像,第5例患者术前一天行~(99)Tc~m-SC显像。 结果(1)核素法、蓝染法和联合法对SLN的检出率分别为87.80%、70.73%和92.68%有统计学意义(P<0.05)。核素法、蓝染法和联合法检出SLN的数目有统计学意义(P<0.01),核素法和联合法(P<0.05)与蓝染法和联合法(P<0.01)检出SLN的数目有统计学意义(P<0.01),核素法和蓝染法差别无统计学意义(P>0.05)。联合法检测声门上型、声门型和贯声门型喉癌的SLN位于Ⅱ区和Ⅲ区,声门下型位于Ⅵ区。声门上型SLN检出率为90.90%(20/22),Ⅲ区SLN检出率为58.97%(23/39),Ⅱ区SLN检出率为41.03%(16/39)。声门型SLN检出率为94.12%(16/17),Ⅲ区SLN检出率为85.71%(18/21),Ⅱ区SLN检出率为14.29%(3/21)。病理结果示9例患者有淋巴结转移,占22.00%。(2)5例患者术前行~(18)F-FDG SPECT-CT显像,提示喉部恶性病变。第5例患者联合~(99)Tc~m-SC显像,提示SLN有转移。 结论核素法和染料法均可探测喉癌的SLN,联合法探测SLN的检测率高于核素法、染料法,因而应用联合法探测cN_0期喉癌的SLN是有效和可行性的方法。对于声门上型和声门型cN_0期喉癌术中侧重Ⅲ区和Ⅱ区的颈部淋巴结清扫。~(18)F-FDG SPECT-CT显像有助于喉癌原发肿瘤的诊断,可为术前分期和进一步的治疗提供可靠依据。 第二部分肿瘤-睾丸抗原的表达与喉癌临床特征相关性的研究 目的了解不同分期喉癌患者手术前后的肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)家族中的MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4的血清学浓度变化情况,筛选喉癌诊断的CTA血清标志物;从蛋白水平了解这些CTA家族成员在喉癌组织及癌旁组织中的表达水平,分析这些指标与喉癌临床特征的相关性;并进一步探讨外科切缘的可行性。 方法与鳞状上皮转化及分化的标志(CK-13、CK-19)比较,(1)采用ELISA法检测25例喉鳞患者手术前、手术后血清中的MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4,并进一步检测46例喉鳞患者手术前组、35例喉鳞患者手术后组和15例正常人血清中的五种CTA。(2)采用免疫组化法和Western-blot方法检测35例喉鳞癌患者癌中心区、癌旁0.5cm、癌旁1cm、癌旁2cm和淋巴结中MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4的表达情况。 结果(1)ELISA法检测25例喉鳞患者手术前、手术后血清中MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1和SSX-4浓度有显著性差异(P<0.05),SSX-2、CK-13和CK-19手术前后的浓度均无显著性差异(P>0.05)。在46例喉鳞患者手术前组、35例喉鳞患者手术后组和15例正常人中,MAGE-A1、MAGE-A3和CK-13手术前组和正常人组血清的浓度有显著性差异(P<0.05)。NY-ESO-1手术前组、手术后组和正常人组血清的浓度均有显著性差异(P<0.05)。SSX-4的浓度手术前组、正常人组两组之间有统计学差异,手术后组、正常人组两组之间有统计学差异(P<0.05)。 (2)免疫组化法检测七种蛋白在癌中心区、癌旁0.5cm、癌旁1cm、癌旁2cm中的表达逐渐下降,其中MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2、SSX-4(P<0.05),而CK-13和CK-19癌中心区>癌旁0.5cm(P>0.05),癌中心区>癌旁1cm>癌旁2cm(P<0.05)。Western-blot方法检测检测的结果与免疫组化法结果相同。 结论(1)MAGE-A1和MAGE-A3有可能成为喉鳞癌诊断和预测复发的CTA血清标志物,NY-ESO-1有可能成为喉鳞癌诊断和预测早期复发的CTA血清标志物。 (2)MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4这五种CTA指标在喉鳞癌中具有较高的表达率,并从分子生物学角度提示了将临床上距肿瘤边缘0.5cm以上定为外科切缘是相对安全的。……   
[关键词]:喉癌;前哨淋巴结;染色;~(18)F-氟代脱氧葡萄糖;喉癌;肿瘤-睾丸抗原;血清标志物;外科切缘
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:山西医科大学2009年