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冷冻保护剂低温连续导入方法及神经干细胞冻存的研究

于小川

   神经干细胞(NSCs)因其移植后不具有致癌性等优点,已成为治疗神经系统退行性疾病和神经系统损伤的最优选择。为了更有效地利用神经干细胞,建立神经干细胞库,神经干细胞的低温保存技术受到了广泛的关注。目前,低温保存神经干细胞主要采用的是慢速冻存,但是这种方法的冻存效果以及冻存技术还有需要提高和完善的地方。玻璃化法作为一种新型的、简便的低温保存方法可以有效地克服慢速冻存的缺点,但是玻璃化法需要高浓度的保护剂(CPA)才能实现,保护剂导入导出过程会给细胞带来很大的渗透损伤和毒性损伤。本文对自主研发的升降式程序降温仪的关键单元的调试基础上,完善了具有低温处置、连续导入和连续降温等多功能的升降式程序降温仪,并对神经干细胞低温连续导入过程进行较为系统的实验研究。 论文校验了低温热电偶,测试了冷冻容器内的保温性能,测试了冷冻容器内部径向温度分布,通过加装套筒减小容器直径,使容器内部不同高度的径向温度分布达到了设计要求。自主研发的升降式程序降温仪无论在控温精度和控温速率均满足实验要求。 对神经干细胞单细胞悬液的联合玻璃化保护剂的低温连续导入及分步洗脱过程进行了研究。通过试验考察了平衡时间,连续降温速率和最佳导入速率等参数对神经干细胞单细胞悬液活性的影响。实验结果表明,在初始温度为-5℃,总接触时间为5min时,神经干细胞最佳降温速率率5℃/min,最佳导入速率为0.53ml/min。 最后综合各种参数的影响,筛选出最优低温连续导入方案,即在降温速率为5℃/min,导入速率为0.53ml/min,初始温度为-5℃条件下,每步导入CPA体积为62μl,83μl,122μl,190μl,343μl;每步导入后对应的平衡时间为62s,52s,42s,32s,22s,能够保证神经干细胞活率为90.5%。……   
[关键词]:神经干细胞;玻璃化;低温保存;冷冻保护剂;连续导入
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:大连理工大学2009年