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鸡毒支原体重庆分离株致病性及膜蛋白的初步研究

钟小艳

   鸡毒支原体(Mycoplasma Gallisepticum,MG)感染也称为慢性呼吸道病(ChronicRespiratory Disease,CRD)。随着养鸡集约化程度的提高,饲养方式的改变以及饲养密度的提高,在通风不良、空气中氨和灰尘增加或气温骤变等环境中极易诱发本病;甚至接种鸡新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎等活疫苗后也都可能诱发本病。本病分布于世界各地,可通过水平和垂直方式传播,因此该病在鸡群中可长期存在和蔓延。根据血清学调查,鸡群的感染率平均在50%~80%之间。据统计,MG感染鸡群后,雏鸡的弱雏率增加10%左右,蛋鸡的产蛋率下降10%~20%,肉鸡的体重减少38%,出栏期延长,饲料转化率降低20%,并可间接的引起大量的药费开支,同时造成禽产品中药物残留,所以该病是危害养鸡业的重要疾病之一。因此,多年来许多国家对该病的防制(治)非常重视。MG膜蛋白是重要的保护性抗原,国内外文献报道的MG膜蛋白抗原成分分子量不完全一致,迄今为止还没有有关重庆地方性MG致病性及膜蛋白的报道。本试验旨在对重庆分离到的CRD病原的致病性、膜蛋白的组成及免疫原性进行初步研究,为该病的诊、防、治提供重要的科学依据。 1.重庆分离MG株的致病性分析 目的了解MG重庆分离株的致病性。方法用标准株及重庆分离MG株传代5次的液体培养物经滴鼻+口服途径接种20日龄健康公鸡,攻毒8天后以10个剂量的IB-H120作为激发感染,记录整个试验期各组鸡增重及发病情况,剖检全部鸡只、观察气囊受损情况并计分。结果攻毒鸡在激发感染前未见任何临床症状,呈隐性感染,激发感染后全部发病;各攻毒组鸡只增重极显著的低于对照组,且重庆分离MG组极显著低于标准株PG_(31)组;各攻毒组鸡气囊受损极显著的高于对照组(0)。结论鸡感染重庆分离MG株后没有外来激发多呈隐性感染状态,感染后,鸡增重缓慢、生长发育严重受阻,气囊严重受损。 2.MG重庆分离株膜蛋白的提取及SDS-PAGE分析 目的了解MG重庆分离株的膜蛋白组成及异同。方法采用Triton-100结合低浓度KI提取MG膜蛋白,并用SDS-PAGE方法对膜蛋白进行分析。结果得到了高产量的膜蛋白成分,SDS-PAGE显示三株分离株与标准株PG_(31)膜蛋白组成相似,一株分离株与标准株及其他分离株的膜蛋白组成及主要膜蛋白成分存在较大差异。结论Triton-100结合低浓度KI提取MG膜蛋白是一种较好的方法,重庆MG感染可能存在多样性。 3.MG重庆分离株膜蛋白的免疫原性研究 目的了解标准株及重庆分离MG株膜蛋白的主要抗原成分。方法提取标准株PG_(31)及重庆分离MG株ZY2、ZY4的膜蛋白免疫鸡自制抗血清,用免疫印迹(West-blotting)分析MG菌株膜蛋白的免疫原性。结果分离株ZY2的免疫原性与PG_(31)表现了高度的一致性,共有三条特异性带,其分子量大小大致为100kDa、66kDa、42kDa。ZY4株与自身抗血清反应时也出现了三条带,但是除了100kDa、42kDa的带,还有一条75kDa的带而少了66kDa的带。能与每株抗血清都发生良好反应的蛋白带有2条,分子量大致为100kDa、42kDa。结论MG膜蛋白具有免疫原性,且各菌株之间存在共同的具有免疫原性的蛋白质。……   
[关键词]:鸡毒支原体;致病性;膜蛋白
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南大学2009年