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仙茅入血成分的检测及其在不同机体状态大鼠体内药代动力学差异研究

霍秀颖

   本研究为国家“973”计划课题《基于“药性构成三要素”的中药药性实质研究》(课题编号2007CB512605)的一部分,中药药性理论是中药临床应用的基础与指导,该课题着重考察中药药性形成和药性表达的诸种因素,提出“药性是药物作用于机体状态的、与化学成分相关的生物效应的概括和归纳”工作假说,即“三要素”学说,认为机体状态、化学成分及生物学效应是构成药性的三要素。其中,机体是药物发挥作用的载体,是功效产出的依托,是构成药性的重要要素。不同的机体状态如何用各种生理指标进行表征,以及不同状态如何影响药物生物效应的表达是研究的内容之一。仙茅为候选药物之一,有必要对其体内代谢状况做一研究,为阐述药性实质提供一定的实验依据。 仙茅为石蒜科植物仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的干燥根茎,其味辛,性热;有毒;归肾、肝、脾经;为常用补益药,具有补肾阳,强筋骨,祛寒湿等功效,主治阳痿精冷、筋骨痿软、阳虚冷泻等症。含有酚类成分及其衍生物、环菠萝蜜烷型三萜皂苷、多糖、鞣质等多种化学成分。目前对仙茅的研究主要集中在化学成分和药理作用两方面上,尚无仙茅体内代谢的研究报道,本文旨在从化学成分角度,探讨同一中药的相同化学成分在不同状态机体中是否存在代谢差异。 实验部分第一章首先拟定仙茅提取方法,并对提取物进行稳定性考察,以保证为动物实验提供质量稳定、可控的药品,结果表明,仙茅水提物经水浴蒸干后,以指纹图谱及仙茅苷含量为指标,至少在5周内稳定。 第二章分离仙茅中两个含量较大成分——仙茅苷和苔黑酚葡萄糖苷,并测定分离成分的纯度,结果表明,分离方法简单,样品纯度较高。 第三章主要确认仙茅入血成分,入血成分是中药发挥药效的主要成分之一,采用DAD全波长扫描,梯度洗脱的方法,测定给提取物大鼠血浆、空白血浆以及仙茅提取物的指纹图谱,通过比较各样品色谱图,在给提取物的大鼠血浆中发现一入血成分,药材指纹图谱在相同保留时间也存在一强峰,经LC-MS-MS测定,入血成分和提取物中相同保留时间的相应成分均出现了m/z 345的一级离子峰和m/z 285的二级离子峰,因此确定两个峰为同一成分。分离药材中相应成分,经~1H-NMR和~(13)C-NMR测定,将数据与文献对照,确认该成分为苔黑酚葡萄糖苷。仙茅苷作为仙茅的指标性成分,具有增强免疫的功能,为仙茅有效成分之一,然而,含药血浆中未检测到仙茅苷,脏器和粪便中也检测不到,据此推测仙茅苷不是以原型吸收入血,而是在消化道即被转化为其他物质,实验表明,将仙茅苷加入人工胃液中,37℃孵育5min后,点于硅胶G薄层板,结果显示,仙茅苷对照品在Rf值为0.39处出现一橙色斑点,而经人工胃液消化的样品,仙茅苷斑点消失,出现一Rf值为0.10的淡灰色斑点,说明仙茅苷容易在人工胃液中转化为其他成分,因此血浆中检测不到原型。 第四章考察苔黑酚葡萄糖苷在阳虚大鼠和正常大鼠体内药代动力学过程的差异。用氢化可的松复制阳虚模型,正常大鼠给予生理盐水,2周后,于给药后不同时间点取血,测定,绘制药时曲线,可以看出,苔黑酚葡萄糖苷在阳虚大鼠体内1h-2h间,血药浓度保持稳定,而正常大鼠血药浓度达峰后迅速减少,说明苔黑酚葡萄糖苷在阳虚大鼠体内较在正常大鼠体内滞留时间长。用DAS2.1.1软件处理数据,药物在正常与模型大鼠体内过程均符合二室模型,计算药代动力学参数,V1/F、k_(10)、Ka、t_(1/2)Ka、AUMC_(0-∞)、t_(1/2z)(min)及MRT_(0-∞)等参数在不同机体状态大鼠体内存在较大差异。 第五章考察入血成分苔黑酚葡萄糖苷的免疫活性。实验结果表明苔黑酚葡萄糖苷对环磷酰胺免疫抑制小鼠的白细胞水平无明显影响,低剂量苔黑酚葡萄糖苷能增加环磷酰胺免疫抑制小鼠的胸腺指数,对脾指数无显著影响;对迟发型超敏反应无显著影响。表明苔黑酚葡萄糖苷在拟定实验条件下,无明显免疫活性。提示苔黑酚葡萄糖苷不是仙茅免疫活性的有效成分,至于苔黑酚葡萄糖苷的其它生物活性,还有待进一步的研究。 本论文在确认仙茅水提取物入血成分的基础上,考察入血成分在不同机体状态大鼠体内的药代动力学过程。实验结果总结如下:(1)仙茅指标性成分及有效成分的仙茅苷不能以原型吸收入血,其口服给药后,在胃液中即被转化为其他物质。其转化后的物质是否入血未经实验证实;(2)仙茅水提取物的一个入血成分为苔黑酚葡萄糖苷,本文建立了苔黑酚葡萄糖苷血药浓度的HPLC测定方法;(3)苔黑酚葡萄糖苷在正常和阳虚大鼠体内的药代动力学过程存在差异,提示不同机体状态的代谢水平存在差异,差异产生的原因值得进一步研究。……   
[关键词]:机体状态;仙茅;入血成分;苔黑酚葡萄糖苷;仙茅苷;药代动力学
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:北京中医药大学2009年
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