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大白菜干烧心病致病过程中基因表达序列标签(EST)分析

赵熙

   大白菜(Brassica campestris L. ssp. Pekinensis)原产于中国,是我国蔬菜栽培分布最广、种植面积最大的蔬菜作物之一,也是我国的主要出口创汇蔬菜之一。但是近年来大白菜“干烧心”病却严重影响了其内部质量和出口创汇。由于大白菜资源中缺少抗性材料,以及对植物抗病机制认识的匮乏,干烧心病抗病育种一直是蔬菜育种的重大难题。只有深入研究植物的抗病机制,才能从根本上解决这一问题。大量研究表明此病是由于缺钙引起的生理性病害,不同品种间在抗干烧心病特性上表现出明显的差异,选育抗干烧心病品种已引起育种家的关注。本试验采用离体叶片溶液扦插法,研究了低钙条件下大白菜心叶的抗性及症状表现。进一步运用抑制差减杂交(SSH)技术构建cDNA文库,应用EST技术并与生物信息学分析技术相结合,通过阐明大白菜在干烧心病致病过程中相关基因的表达分析,从基因表达整体水平来研究大白菜抗病机制。 离体叶片溶液扦插结果表明:筛选时EDTA-Na2的适宜浓度为2mmol/L,低浓度的EDTA-Na2不能完全排除钙的影响;不同品种对干烧心的抗性有明显差异;发病部位及症状与品种关系密切,不同品种干烧心的发病部位和表现症状有所不同,主要的发病部位集中在叶缘和叶柄;叶片扦插法适合于大量材料的鉴定,此法简单、方便、迅速,是当前干烧心鉴定方法中既经济又实用的一种鉴定方法。 抑制差减杂交研究以大白菜干烧心病高感品种B120正常供钙的叶片cDNA为驱动子(Driver),缺钙处理的叶片cDNA为检测子(Tester),进行抑制消减杂交,构建了抑制消减文库。在获得的525条具有编码蛋白质功能的EST序列中有428个序列功能已知,74个与推测、假想或功能未知的蛋白质具有很高的同源性。与428条EST具有最高配准的已知功能基因分别来自13个物种。在这个抑制差减cDNA文库中,对获得的已知基因按功能分为12类:初级代谢、能量代谢、细胞生长分裂、转录相关、蛋白质合成、细胞物质降解、转运相关、细胞结构、信号转导、抗病与防御、次生代谢,和其它代谢。说明干烧心病致病过程是一个多因素影响的复杂过程,其中一些基因的表达变化可能在致病过程中起重要作用。这些结果为进一步的干烧心病致病机理研究提供了基础与依据。……   
[关键词]:大白菜;干烧心;鉴定;抑制差减杂交;表达序列标签
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:天津大学2008年
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