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p21~(waf1)基因转染对乳腺癌细胞增殖活性和中心体复制的影响

种瑞峰

   【目的】通过构建pIRES-p21~(waf1)真核表达载体,并利用脂质体介导基因转染技术导入人乳腺癌细胞系,检测转染前后乳腺癌细胞中心体的复制、癌细胞增殖能力,分析细胞周期和细胞调亡,揭示乳腺癌细胞增殖机制,为乳腺癌的分子诊断、治疗提供一条新的途径。 【方法】应用脂质体介导法将构建的pIRES-p21~(waf1)真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,并使其得到稳定的表达,通过实时荧光定量RT-PCR技术、western免疫印迹检测p21~(waf1)基因表达及蛋白表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化,免疫荧光技术检测转然前后中心体复制的变化情况。 【结果】pIRES-p21~(waf1)转染后,p21~(waf1)基因和蛋白得到了稳定的高表达,乳腺癌细胞生长明显受抑制,细胞周期停滞于G_1期,转染组G_1期、S期和G_2/M期细胞比例分别为(70.52±3.21)%、(16.38±1.17)%、(9.42±0.98)%,未转染组则为(49.84±1.58)%、(36.83±1.36)%、(15.64±1.09)%,二者相比差异显著,P值分别<0.01、<0.05、<0.05。中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前明显减少(P<0.01)。 【结论】p21~(waf1)基因转染能够抑制人乳腺癌细胞增殖和中心体的异常复制,进而阻止乳腺癌的发生发展,可能成为乳腺癌治疗的一种新手段。……   
[关键词]:基因转染;p21~(wafl);中心体;细胞增殖;乳腺癌
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:青岛大学2008年