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口蹄疫DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫原性的初步研究

常巧呈

   口蹄疫(Foot-and-Mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouthdisease virus,FMDV)引起偶蹄动物的最烈性传染病之一。目前FMD呈世界范围流行趋势。特别是近几年来O型、A型和AsiaⅠ型FMD在我国周边国家或东南亚地区时有发生,对我国养殖业构成了严重的威胁。 以本室构建的复合多表位表达盒OAAT及AsiaⅠ型FMDV的P1-2A-3C为基础构建了FMDV核酸疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C。用限制性酶切对其进行了鉴定。该DNA疫苗转染HeLa细胞表达的蛋白在间接免疫荧光(IFA)检测中与O型FMDV多克隆血清和AsiaⅠ型FMDV多克隆血清均能结合,在FITC标记的二抗作用下经伊文斯兰染色可见较好的绿色荧光。 以BALB/c小鼠为试验动物,应用该DNA疫苗对小鼠进行免疫接种后,检测体液与细胞免疫指标。研究结果表明,pIRES-OAAT-P1-2A-3C及灭活苗免疫组的小鼠均能产生特异性抗体(与对照组相比,p<0.05)。pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫组抗AsiaⅠ、O抗体效价,低于灭活疫苗免疫组。但均高于空质粒pIRElneo对照组及PBS对照组(p<0.01)。流式细胞仪检测所得数据统计学分析结果表明,与灭活苗、空质粒pIRElneo对照组及PBS对照组比较,用所构建的DNA重组体DNA疫苗免疫的试验组小鼠的T淋巴细胞亚类CD4+和CD8+的数量显著提高(p<0.05)。而各对照组之间差异不显著。用ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ斑点数试验结果表明,pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫组IFN-γ斑点数量(64.726)较灭活苗(39.625)显著增多(p<0.05)。而各对照组之间差异不显著。应用MTT法检测淋巴细胞增殖结果显示,pIRES-OAAT-P1-2A-3C和灭活苗组小鼠T淋巴细胞均出现较明显的特异性和非特异性增殖反应。且pIRES-OAAT-P1-2A-3C组增殖能力强于灭活疫苗组(p<0.05)。 给豚鼠进行2次免疫,用250ID50的FMDV进行攻击,观察其保护效果。灭活疫苗组4只豚鼠均未出现任何FMD症状,表明获得完全保护。pIRES-OAAT-P1-2A-3C组有2只获得完全保护。说明该疫苗具有一定保护效果。 上述结果证实了表达盒OAAT与P1-2A-3C的表达组合在鼠体内的良好的免疫原性。为其它载体应用该组合进行疫苗研制提供了试验依据。为研制有效的口蹄疫多价苗的作了一定的试验准备并提供物质储备。……   
[关键词]:口蹄疫病毒;DNA疫苗;免疫
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:延边大学2008年