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斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌的PLGA微球和脂质体疫苗的制备及免疫原性研究

邓龙君

   本文研究了斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌的PLGA微球疫苗和脂质体疫苗对斑点叉尾鮰免疫机能和免疫保护效应的影响。主要结果如下: 1.本试验采用复乳挥发法制备了嗜麦芽寡养单胞菌的PLGA微球疫苗,并测定其粒径大小约为(2.2±0.5)μm。600尾体重100±5g的斑点叉尾鮰分为15组,注射、口服、浸泡三种免疫途径各5组,每个免疫途径又包括低、中、高三种不同免疫剂量的PLGA微球疫苗组(Ⅰ组-Ⅲ组)、生理盐水对照组(Ⅳ组)和未包被嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗组(Ⅴ组),疫苗免疫每两周1次共计3次。定期采血后测定血液免疫指标的变化,并用细菌攻毒试验检测免疫保护效应。结果显示本实验制备的PLGA微球疫苗包封率为88.93%,各免疫途径的疫苗免疫组均较生理盐水对照组能明显增强白细胞的吞噬活性、杀菌活性、血清溶菌酶、补体C_3、血清蛋白含量和抗体IgM水平。腹腔注射活菌攻毒后,注射免疫途径剂量为200μg/尾和100μg/尾受免组鱼(73.33%,66.68%)相对成活率较嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗(64.17%)受免组鱼分别高出9.16%、2.51%,而50μg/尾的受免组鱼(49.17%)相比灭活苗组则低15%;口服免疫途径PLGA微球疫苗免疫组(Ⅰ组-Ⅲ组)的相对存活率分别为43.33%、65%和75%,而灭活苗口服组Ⅴ组仅有6.68%,表明PLGA微球疫苗对嗜麦芽寡养单胞菌病具有显著的免疫保护效应;而浸泡各免疫组的保护效应则不明显。 2.试验还采用反相蒸发法制备了脂质体疫苗,并用透射电镜测定其粒径大小约为(1±0.3)μm。将体重600±5g的斑点叉尾鮰分为15组,采用口服、注射和浸泡三种免疫方式各5组,每个免疫方式又包括低、中、高三种剂量的脂质体疫苗组(1组-3组)、生理盐水对照组(4组)和灭活苗组(5组),免疫每两周1次共3次。定期采血测定血液免疫指标的变化,并用细菌攻毒检测免疫保护效应。结果显示本实验制备的脂质体疫苗包封率为53.23%,各免疫途径的疫苗免疫组均能较对照组明显提高受免组鱼的血液免疫指标水平。腹腔注射活菌攻毒后,注射免疫剂量为200μg/尾、100μg/尾的受免组鱼相对成活率分别为80%、70.83%,较灭活苗受免组鱼分别高15.83%和6.66%,而50μg/尾的受免组鱼(53.33%)相比灭活苗组则低10.84%;口服途径脂质体疫苗免疫组(1组-3组)的相对存活率分别为39.18%、51.68%和58.33%,而灭活苗口服组5组仅有6.68%,表明脂质体疫苗能有效的保护抗原的免疫原性避免被破坏;浸泡免疫时可能受到水中阳离子和有机物的影响而导致免疫保护效应不理想。……   
[关键词]:斑点叉尾鲴;嗜麦芽寡养单胞菌;PLGA微球疫苗;脂质体疫苗;免疫
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2008年