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树莓离体快繁体系建立及叶片不定芽诱导研究

赵雪兰

   本研究分别以树莓‘Chilliwack 、‘Dinkum 、‘Kotata 和‘Shawnee 的顶芽和茎段为外植体,通过初代培养、继代增殖和生根培养,建立起树莓离体快繁体系。在此基础上,通过正交试验设计并结合方差分析和多重比较,探讨了基因型、基本培养基、不同种类的生长素和细胞分裂素、暗培养以及AgNO_3对树莓叶片不定芽再生的影响。试验结果如下: (1)外植体建立阶段:四个品种中‘Kotata 的外植体成活率最高,为48.29%,其次是‘Shawnee (41.73%),这两个品种的最高成活率都出现在MS+BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L+GA_30.5mg/L(2#)上。‘Chilliwack 和‘Dinkum 最高成活率分别为31.1%和21.53%,且最高成活率都出现在MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L(1#)上。说明以MS为基本培养基附加BA(1.0mg/L~2.0mg/L)和较低浓度的IBA(0.2mg/L)的培养基有利于树莓无菌材料的建立。 (2)增殖阶段:MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L对‘Chilliwack 而言是最合适的增殖培养基。1/2MS+BA1.0mg/L+IBA0.4mg/L是‘Dinkum‘最合适的增殖培养基。对‘Kotata 和‘Shawnee 来说,MS+BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L是最佳的增殖培养基。 (3)生根阶段:‘Kotata 的生根效果优于其它三个品种;1/4MS的生根效果明显地好于其它三个培养基;蔗糖是生根培养基中必需的;生长素和AC在生根前期是必需的,但在后期可有可无。 (4)在所选定的四个树莓品种进行叶片不定芽诱导时发现,‘Chilliwack 表现出最高的再生力,‘Kotata 次之,‘Dinkum 和‘Shawnee 没有不定芽发生。‘Chilliwack 在所选用的32个组合中,在NN69+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L组合上,不定芽诱导率最高(49.67%),且质量最好。‘Kotata 在NN69+BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L组合上,不定芽诱导率达12.13%,质量最好。 (5)通过对TDZ和BA两种细胞分裂素在树莓叶片不定芽再生上的诱导结果进行多重比较和方差分析发现,BA的诱导效果优于TDZ。 (6)通过比较QL、WPM、NN69、MS四种基本培养基对树莓叶片不定芽再生的影响后发现,高盐浓度、高N含量的MS基本培养基有利于不定芽的再生,‘Chilliwack 叶片不定芽再生率为64.13%,‘Kotata 的再生率为23.21%,较NN69上的再生率分别提高15.44%和11.07%。其余两种基本培养基都会导致‘Chilliwack 和‘Kotata 叶片不定芽再生率的明显降低。 (7)暗培养对树莓叶片不定芽诱导有显著的促进效果。暗培养14d可将‘Chilliwack 不定芽再生率由62.00%提高到83.32%,‘Kotata 不定芽再生率提高了11.87%,但随着暗培养时间延长,叶片不定芽再生率下降。 (8) 0.5mg/L~2.0mg/LAgNO_3的加入抑制了‘Chilliwack 和‘Kotata 叶片不定芽的再生,且随着浓度的增加,对不定芽的再生抑制作用越明显,‘Chilliwack 不定芽再生率由0.0mg/LAgNO_3时的61.17%下降到2.0mg/LAgNO_3时的9.98%。‘Kotata 叶片的再生率也由0.0mg/LAgNO_3时的22.10%下降到2.0mg/LAgNO_3时的7.42%。但AgNO_3改变了树莓不定芽的再生途径,以直接从叶片再生不定芽的方式为主。……   
[关键词]:树莓;离体培养;不定芽再生;叶片培养
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2008年