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载脂蛋白M基因表达影响因素及其血浓度与冠状动脉疾病相关性研究

屈晓冰

   背景 载脂蛋白M(apoM)是一种新近发现的载脂蛋白,蛋白结构属于脂质转运蛋白超家族成员,主要存在于高密度脂蛋白(HDL)中,少量存在于富含甘油三酯的脂蛋白(triglyceride-rich lipoprotein,TGRLP)和低密度脂蛋白(LDL)中。现有的动物实验发现apoM的缺失会导致血浆preβ-HDL的消失和异常大的HDL颗粒的出现。在LDL受体缺陷小鼠,腺病毒致肝脏apoM的过度表达可使动脉粥样硬化病变明显减少。提示apoM可调节HDL代谢,并具有抗动脉粥样硬化的作用。时至今日,虽然apoM的cDNA在1999年被克隆和测序,但是apoM的生理功能及其与动脉粥样硬化疾病的关系依然不甚明了。现已证明糖代谢的紊乱可以促进动脉粥样硬化的发生发展,糖尿病已视为冠心病的等危症。罗格列酮(RSG)是目前临床上常用的治疗糖尿病的有效药物,它是否能影响apoM的作用知之甚少。 目的 研究糖尿病大鼠血清apoM水平和肝肾脂肪组织apoM mRNA表达的变化以及RSG的影响,探讨apoM作用和调控的可能机制。 方法 采用40只雄性SD大鼠进行动物实验,建立对照组、高脂组、糖尿病组和糖尿病RSG干预组4组动物模型。实验模型建立前采血检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)。糖尿病大鼠模型的建立参照周氏等方法,给予高脂高糖饲料喂养、腹腔注射链脲佐菌素。应用RSG对糖尿病大鼠干预治疗8周。全部动物实验于第15周结束时集中处死动物,搜集血标本和肝、肾、脂肪组织标本。检测各组大鼠的血FBG、FINS、TG、TC浓度和各组大鼠肾脏病理改变。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组的大鼠的血apoM水平;并与血FBG、FINS、TG、TC水平进行相关分析。逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定各组大鼠肝肾脂肪组织apoM mRNA的表达。 结果 1.与对照组和高脂组大鼠比较,糖尿病大鼠血清apoM水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05),糖尿病大鼠血清apoM水平较对照组的下降65.4%;而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠的血清apoM水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。 2.各组大鼠的肝、肾、脂肪组织均有ApoM mRNA的表达,其中肝组织apoM mRNA的表达最高,肾组织次之,而脂肪组织的表达最低(P均<0.05)。与对照组相比,高脂组、糖尿病组的大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达明显减少(P均<0.05),与对照组比较,糖尿病大鼠肝脏apoM mRNA表达下降41.4%,肾脏apoM mRNA表达下降22.9%。而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达量均有明显增加(P均<0.05)。 3.大鼠血清apoM水平,与血清TG(r=-0.466,P=0.011),TC(r=-0.568,P=0.001),FBG(r=-0.371,P=0.000),INS(r=-0.768,P=0.048)水平,均呈显著负相关。 结论 糖尿病大鼠血清apoM水平和肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达均下降;罗格列酮上调糖尿病大鼠的血清apoM浓度和肝、肾、脂肪组织中的apoM mRNA的表达;apoM水平与TG、TC、FBG和FINS呈显著负相关;提示apoM参与血糖和血脂的代谢并受罗格列酮的影响。 背景 载脂蛋白M(apoM)被认为是在高密度脂蛋白(HDL)代谢及抗动脉粥样硬化中发挥重要作用的载脂蛋白。过氧化物酶增殖体激活型受体(PPAR)属于核激素受体超家族的新成员。PPAR与其配体结合可发挥生物学作用,在脂肪细胞代谢和动脉粥样硬化形成和发展中起重要作用。胰岛素增敏剂RSG是PPARγ的人工配体,通过活化PPARγ而起作用。本实验的前期研究发现糖尿病大鼠血清apoM水平与组织apoM mRNA的表达下降,罗格列酮可上调糖尿病大鼠的血浆apoM浓度和组织apoM mRNA的表达,但是apoM的作用机制究竟与PPARγ是否有关,糖尿病大鼠PPAR的表达有何改变,PPARγ配体对两者表达的影响如何,目前罕见文献报道。 目的 研究糖尿病大鼠PPARα、PPARγ表达的变化,以及大鼠PPARα、PPARγ表达与apoM表达的相关性,并探讨PPARγ配体对表达的影响。 方法 采用40只雄性SD大鼠进行动物实验,建立对照组、高脂组、糖尿病组和糖尿病RSG干预组共4组动物模型(见第一章)。全部动物实验于第15周结束时集中处死动物,搜集血标本和肝肾脂肪组织标本。逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定各组的大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达;逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肝、肾、脂肪组织PPARαmRNA和PPARγmRNA的表达。分析大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA与PPARαmRNA和PPARγmRNA表达的相关性。 结果 1.PPARαmRNA在大鼠的肝脏表达最高,其次在肾脏,脂肪组织的表达最低。与对照组和高脂组大鼠比较,糖尿病大鼠PPARαmRNA在肝脏组织的表达明显减低(P均<0.05);而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠PPARαmRNA的表达明显升高(P<0.05)。 2.PPARγmRNA在大鼠脂肪组织高表达,明显高于肝脏和肾脏组织(P均<0.05)。与对照组和高脂组比较,糖尿病大鼠PPARγmRNA在肝脏和脂肪组织中的表达明显升高(P均<0.05);而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠PPARγmRNA的表达明显降低(P<0.05)。与对照组和高脂组比较,糖尿病大鼠PPARγmRNA在肾脏组织的表达明显减低(P均<0.05);而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠PPARγmRNA的表达明显升高(P<0.05)。 3.大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA与PPARαmRNA的表达均无相关性,而与PPARγmRNA的表达均有显著相关。在大鼠肝脏和脂肪组织中,apoM mRNA与PPARγmRNA的表达呈显著负相关(P均<0.01);而在肾脏组织中apoM mRNA与PPARγmRNA的表达呈显著正相关(P<0.01)。 结论 PPARαmRNA在大鼠的肝脏表达最高,PPARγmRNA在大鼠脂肪组织呈现高表达;PPARγ激动剂可影响糖尿病大鼠PPARαmRNA和PPARγmRNA的表达;大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA与PPARγmRNA的表达呈显著相关;提示apoM可能通过PPARγ的调控而起作用。 第三章载脂蛋白M与冠状动脉粥样硬化性病变的研究 背景 血脂异常不仅与动脉粥样硬化的发生发展有着密切的关系,而且对冠心病的急性事件(冠脉猝死、急性心肌梗死和不稳定型心绞痛)的发生起重要作用。载脂蛋白作为脂蛋白的主要组成部分参与了血脂的代谢和调节,载脂蛋白异常和冠心病的发生发展密切相关。已证实HDL-C低水平、LDL-C和TG高水平可以增加患心血管疾病的风险,HDL被广泛认为具有心脏保护和抗动脉粥样硬化的作用。载脂蛋白M(apoM)对HDL的代谢起重要作用,具有抗动脉粥样硬化的作用。然而,apoM的生理功能及与心血管疾病的关系仍未明了,关于apoM与不同冠状动脉粥样硬化病变程度的研究目前尚未见报道。 目的 研究apoM与冠状动脉粥样硬化病变的关系,进一步揭示apoM的生物学功能及apoM在人血清中含量的临床意义。 方法 采用经典的冠状动脉造影术检查,选择73例冠心病患者(冠心病组)及47例冠状动脉造影正常者(对照组)作为研究对象。根据冠心驳牟煌俅怖嘈徒谛牟』颊叻治毙怨诼鲎酆险?ACS)组和稳定型心绞痛(SA)组,并根据冠状动脉病变数量、Gensini冠状动脉粥样硬化的狭窄程度评分和ACC/AHA制定的冠状动脉A、B、C型病变分型评估冠状动脉粥样硬化病变的程度。应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测研究对象血清中apoM和瘦素的水平,分析不同临床类型冠心病和不同程度冠状动脉粥样硬化病变的apoM的变化及规律,并分析apoM与瘦素、HDL-C、apoAI、LDL-C、LP(a)、FFA、apoB等因素的相关性。 结果 1.与对照组相比,冠心病组血清apoM的水平明显降低,瘦素水平明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。 2.急性冠脉综合征组的血清apoM水平明显低于稳定型心绞痛组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。 3.冠心病患者血清apoM的水平与冠脉病变数量、冠脉狭窄程度和冠脉病变分型均有关。多支病变组血清apoM水平明显明显低于单支病变和双支病变组(P均<0.05),中度狭窄组血清apoM水平明显低于轻度狭窄组(P<0.05),重度狭窄组血清apoM水平分别低于轻度和中度狭窄组(P均<0.05),C型病变组血清apoM水平分别低于A型和B型病变组(P均<0.05)。 4.血清apoM的水平与冠脉病变数量、病变分型、Gensini积分呈负相关(P均<0.05),与瘦素、HDL-C、HDL-C/TC呈正相关,与LDL-C、FFA呈负相关(P均<0.05)。多元逐步回归显示血清apoM的水平与瘦素的关系最密切。 结论 冠状动脉粥样硬化心脏病患者血清apoM水平明显降低,冠状动脉粥样硬化病变的程度越重,apoM水平越低;apoM的水平与Leptin、HDL-C、HDL-C/TC呈正相关,与LDL-C、FFA呈负相关;提示人血清apoM水平与脂质代谢和冠状动脉粥样硬化的程度有关。……