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产10-HDA菌株的改良及发酵调控

王海燕

   10-羟基-2-癸烯酸(10-Hydroxy-2-Decenoic Acid,10-HDA)是一种迄今为止仅在蜂王浆中发现的不饱和脂肪酸。10-HDA具有抗菌、抗溃疡作用、增强免疫力、抗癌、抗肿瘤作用、降血脂作用。因此10-HDA具有极高的医药保健价值,得到越来越多的关注,本论文主要研究内容是通过诱变,改变出发菌株QYW522产量低且不稳定的现状,并对摇瓶发酵条件进行探讨和优化,在此基础上进一步研究50L发酵罐的发酵条件。 通过比较实验,从紫外线诱变、紫外复合氯化锂诱变、亚硝酸诱变、微波诱变四种诱变方法中,选择正突变率较高的紫外线复合氯化锂诱变作为下一步QYW522原生质体诱变的主要方法。 论文研究了出发菌株QYW522原生质体制备的影响因素,确定了原生质体最佳的形成条件:1%溶菌酶,1.5%蜗牛酶,1%纤维素的酶系统;渗透压稳定剂为0.8mol/LMgSO4;菌龄为30h;酶解温度为33℃;酶解时间为3h。 通过薄层初筛,从高渗再生培养基上共获得73株较有潜力的菌株,最终选择提高率较高的8株突变株进行下一步复筛。摇床复筛,高效液相色谱法检测发酵液中10-HDA的含量,最终筛选出一株产量相对出发菌株提高较多的突变株Uv90s-29。 对突变株Uv90s-29进行形态特征观察,依据《真菌鉴定手册》和相关书籍,初步认为该菌属于半知菌门(Fungi Imperfecti)丛梗孢目(Moniliales),丛梗孢科(Moniliaceae),曲霉族(Aspergillase),曲霉属(Aspergillus Mich.ex Fr),黄-米曲霉组(A.Flavus-oryzae)疏展曲霉(A.Effusus Tiraboschi)。 论文通过单因素实验结合正交实验对突变株Uv90s-29的摇瓶发酵条件进行摸索,确定了碳源是10-HDA最主要的影响因素,其次为氮源,最后是无机盐,最佳培养条件是:接种量为10%,菌龄30h,初始pH为6.0,30℃、220r/min摇床培养72h。 在摇瓶培养条件研究的基础上,论文还进行了50L发酵罐实验,共进行了3批实验,10-HDA的最高产量为29.5342μg/mL,并对发酵过程各参数的变化进行了分析。……   
[关键词]:10-HDA;原生质体诱变;菌种鉴定;HPLC
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东轻工业学院2008年