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镉致HEK293细胞离体线粒体损伤的研究

张娜娜

   镉可以诱导HEK 293细胞发生凋亡并且其凋亡依赖于线粒体途径。研究镉诱导的线粒体损伤对于镉的分子毒理学机制的阐明和镉所致的损伤与致癌机理的研究具有重要意义。本文对镉诱导的HEK 293细胞离体线粒体损伤做了如下研究工作: 1镉对HEK 293细胞离体线粒体膜的损伤 建立镉致HEK 293细胞离体线粒体膜损伤模型,采用分光光度法检测CdCl_2诱导的线粒体渗透性转变孔的开放情况;通过透射电镜鉴定CdCl_2诱导的线粒体形态的改变;采用荧光分光光度计检测线粒体膜电位的变化。结果显示:CdCl_2能够诱导HEK293细胞离体线粒体的功能损伤,镉严重损伤了线粒体的膜系统,导致线粒体膜电位的急剧下降,CdCl_2能诱导线粒体渗透性转变孔的开放,并且这种开放能够被环胞素(CsA)所抑制;电镜结果显示CdCl_2诱导下线粒体肿胀变形。 2镉致HEK 293细胞离体线粒体活性氧及抗氧化系统的变化 本实验利用荧光探针DCFH-DA检测了线粒体内ROS含量的变化;测定了线粒体内两种主要的抗氧化酶SOD和GSH-Px的活力;同时测定了线粒体内MDA的含量变化。结果表明:镉能够引起ROS含量的显著增加:SOD和GSH-Px酶活力在镉的作用下降低明显。说明CdCl_2诱导的离体线粒体氧化损伤,氧化应激可能在镉引发的细胞调亡过程中起重要作用。 3镉对HEK 293细胞离体线粒体酶活力的影响 检测CdCl_2对HEK 293细胞离体线粒体酶活力的影响,主要对与细胞呼吸相关的ATPase和LDH进行了测定。结果表明:CdCl_2能诱发HEK 293细胞离体线粒体内多种酶活力的明显下降,并且随着CdCl_2浓度的增加,Na~+K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和LDH活力都有的显著降低,说明镉可能破坏了线粒体的呼吸系统,对细胞的能量代谢造成阻碍。……   
[关键词]:;线粒体;线粒体渗透性转变孔;线粒体膜电位;活性氧;抗氧化酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京师范大学2008年
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