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OsRac1的抗体制备及其在水稻感染水稻条纹病毒前后的表达变化

赵萍

   水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)是纤细病毒属(Tenuivirus)的代表种,广泛分布于我国南北稻区,给我国的水稻生产造成了严重损失。 G蛋白是普遍存在于真核生物的一类信号蛋白。水稻中的OsRacl基因是人类RAC的同源基因。自从20世纪90年代OsRacl基因被克隆以来人们对之付出了很多的注意力。现有结果显示,OsRacl在抵抗病原生物中发挥着重要的作用。 使用RT-PCR技术成功扩增到水稻中的OsRacl基因,并克隆到pMD18-T载体上,双酶切重组质粒后,将目的片段插入原核表达载体pGEX-4T-3,转化Escherichia.coli DH5α,筛选获得阳性重组表达质粒pG OsRacl,并测定插入的序列,分析是否成功克隆目的基因,且确保在表达载体中没有发生移码突变,由插入的序列可知插入的蛋白分子质量约为23kD. 重组表达质粒转化E coliBL21(DE3),加IPTG诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)获得与预期大小一致的融合蛋白条带。制备了OsRacl抗血清,Western blot结果表明,所制备的抗血清与诱导表达的融合蛋白起特异性反应。 以往对OsRacl的研究多是以定性为主,本文在蛋白质水平上研究OsRacl。为了查明OsRacl是否参与了水稻与条纹病毒的互作,本文利用所获得的抗体对水稻条纹病毒感染水稻前后OsRacl蛋白量的变化进行了研究。结果表明,OsRacl在健康水稻中的蛋白表达量比RSV病株中高。……   
[关键词]:水稻条纹病毒;OsRac1基因;原核表达;抗血清;Western blot
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2008年