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丙戊茶碱体外对星形胶质细胞分泌细胞因子的影响

陈庆才

   目的:研究丙戊茶碱对体外培养的新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞表达NGF、IL-1β和GFAP的影响以及LPS激活对其有何影响。 方法:原代培养新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,以免疫细胞化学染色确定为星形胶质细胞并且细胞纯度达到95%以上,满足实验要求。传代培养到第三代时以1×10~5个/ml的密度接种到24孔培养板中,共96孔。细胞分为两部分,每部分48孔,随机分为8组(n=6),分别为:空白组(P_0)、PPF10μmol/L组(P_(10))、PPF100μmol/L组(P_(100))、PPF1000μmol/L组(P_(1000))、LPS1μg/mL组(L)、PPF10μmol/L+LPS1μg/组(P_(10)+L)、PPF100μmol/L+LPS1μg/mL组(P_(100)+L)、PPF1000μmol/L+LPS1μg/mL组(P_(1000)+L)。一部分作用1天,另一部分作用3天。收集细胞培养液,ELISA检测IL-1β和NGF浓度;收集细胞爬片固定后行SP法抗GFAP免疫细胞化学染色,Image-Pro Plus软件测量GFAP阳性区域的IOD(积分光密度)和AREA(阳性区域面积)。 结果:(1)与空白对照组相比,PPF可增加NGF的浓度(P<0.01),随浓度的升高作用增强;单纯LPS组的NGF与空白对照组相比显著降低(P<0.05);PPF可增加LPS组内NGF的浓度,与单纯LPS组相比显著增高(P<0.01);(2)与空白对照组相比,PPF可减少IL-1β的浓度(P<0.01),作用随浓度的升高而增强;LPS组与空白对照组相比IL-1β显著增加(P<0.01);高浓度PPF(P_(100)、P_(1000))组可减少LPS组内IL-1β的浓度,与单纯LPS组相比差异显著(P<0.01),但低浓度组(P_(10))与单纯LPS组无差异(P>0.05);(3)GFAP阳性区域的IOD(积分光密度)和AREA(阳性区域面积)随PPF的浓度升高而降低,第1天时只有P_(1000)组与对照组相比有显著性差异(P<0.05),第3天时各浓度组与对照组相比都有显著性差异(P<0.05)。LPS可以显著增加GFAP阳性区域的IOD和AREA(P<0.01)。PPF可以减低LPS对IOD和AREA的增加作用(P<0.05),随浓度的升高作用增强。(4)各组之间第1天和第3天趋势大体相似。 结论:LPS可激活AST,使其表达IL-1β增加,NGF减少,使GFAP阳性区域的IOD和AREA增加;而PPF可增加NGF的表达,减少IL-1β的表达,减少GFAP阳性区域的IOD和AREA,因此可能具有神经保护作用。……   
[关键词]:丙戊茶碱;星形胶质细胞;胶质纤维酸性蛋白;神经生长因子;脂多糖
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:苏州大学2008年
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