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亚临床甲状腺功能减退症动物模型的建立

朱帅俊

   目的 亚临床甲状腺功能减退症简称亚临床甲减,又称轻度甲状腺功能衰竭(mildthyroid failure,MTF),是以促甲状腺激素(TSH)水平升高和血清甲状腺素(T_4)水平正常为特征的甲状腺疾病。亚临床甲减可伴不典型或不伴甲状腺功能减退的症状和体征。亚临床甲减的患病率各国报道不一,在1%-10%之间。亚临床甲减的病因与甲减相同,常见的原因为自身免疫。一些药物如锂、α-干扰素、胺碘酮等都能造成TSH值升高。亚临床甲减的主要不良后果是发展为临床甲减和促进缺血性心脏病的发生。妊娠妇女的甲减是轻微的或者是无症状的,胎儿的神经发育也可以受到损伤;如果对妊娠期的甲减给于左甲状腺素(L-T_4)治疗,后代智力将不会受到影响。亚临床甲减对身体多方面的危害已经得到证实,但是亚临床甲减的致病机制尚不清楚。因此,建立亚临床甲减的动物模型以明确亚临床甲减的致病机制显得非常必要。本研究通过手术切除动物的甲状腺组织并用L-T_4替代治疗的方法,探索亚临床甲状腺功能减退症大鼠动物模型的造模方法。 方法 将150-180克的48只wistar雌性大鼠,普通饲料加蒸馏水饲养一周后随机分为4组。 对正常对照(Nc)组(24只)实施假甲状腺切除术:10%水合氯醛溶液麻醉,备皮,切开颈部皮肤,钝性分离结缔组织,仅暴露甲状腺而不损伤甲状腺,随即缝合。术后饲以普通饲料和蒸馏水。每两天记录一次体重。 L-T_4处理组和甲减(HT)组(8只)实施甲状腺全切术:10%水合氯醛溶液麻醉,备皮,切开颈部皮肤,钝性分离结缔组织和胸骨舌骨肌,切断双侧甲状腺肌,摘除两侧和峡部甲状腺,缝合。术后饲以普通饲料和高钙水(0.1%碳酸氢钙)。每两天记录一次体重。 5周后大鼠体重相对稳定,用大鼠固定器固定甲状腺全切后的大鼠,剪尾取血,3000转离心20分钟,分离血清,存入Eppendrof管中,—4℃冰箱中保存,血清TSH、TT_4由固相化学发光酶免疫分析(ICMA)法检测(DPC,USA)。 给与NC组和HT组每天腹部皮下注射安慰剂(PBS溶液)。 L-T_4处理Ⅰ组(8只)每天腹部皮下注射剂量为0.95μg/100g体重的L—T_4,L-T_4处理Ⅱ组(8只)每天腹部皮下注射剂量为1.00μg/100g体重的L-T_4。每天注射一次,连续注射16天,第17天处死大鼠。体重波动在15克之内,以最初配液时所采用的体重;超过15克,重新计算平均体重,重新配液。 第17天,水合氯醛麻醉后,上腹正中切口,游离肋骨,心脏采血,3000转离心20分钟,分离血清,存入Eppendrof管中,—4℃冰箱中保存,待测血清TSH、TT_4。 心脏取血后,穿刺针从左心室进入主动脉,剪开右心耳,迅速灌注600ml左右生理盐水。心脏灌注后,迅速取部分肝、肾组织,称重,液氮罐内冷冻后放入—70℃冷冻箱内保存,测定前肝、肾按照1∶3的比例加入匀浆缓冲液在冰块环境中制备匀浆,离心后取上清待测肝肾T_4、T_3。 当实验组血清TSH高于对照组,而实验组TT_4和对照组没有统计学差异,提示亚临床甲减鼠建模成功。取正常组数据的90%可信区间为正常值范围,计算成功率。 结果 HT组血清TSH水平(3.81±1.14 mIU/L)显著高于NC组和L-T_4处理组(P<0.01),血清TT_4水平检测不到。 L-T_4处理Ⅰ组血清TSH水平显著高于NC组(0.394±0.029 mIU/L VS 0.071±0.022 mIU/L,P<0.01),血清TT_4水平和NC组没有差异(4.01±0.92μg/dL VS4.06±0.96μg/dL,P=0.650)。 L-T_4处理Ⅱ组血清TSH水平显著高于NC组(0.325±0.033 mIU/L VS 0.071±0.022 mIU/L,P<0.01),血清TT_4水平和NC组没有差异(4.13±1.27μg/dL VS4.06±0.96μg/dL,P=0.650)。 NC组血清TSH水平的90%可信区间为0.016 mIU/L~0.239 mIU/L,血清TT_4水平的90%可信区间为2.33μg/dL~5.98μg/dL。L-T_4处理Ⅰ组符合亚临床甲减诊断标准的有6例,成功率为75%;L-T_4处理Ⅱ组符合亚临床甲减诊断标准的有4例,成功率为50%。 L-T_4处理Ⅰ组肾脏TT_4水平和NC组比较没有差异(18.48±2.35 ng/g VS20.26±3.08 ng/g,P=0.215),肾脏TT_3水平显著低于NC组(1.63±0.74 ng/g VS2.90±1.09 ng/g,P<0.05);L-T_4处理Ⅰ组肝脏TT_4水平和NC组没有差异(35.14±5.58 ng/g VS 37.97±4.71 ng/g,P=0.290),肝脏TT_3水平显著低于NC组(1.79±0.84 ng/g VS 3.04±1.17 ng/g,P<0.05)。 L-T_4处理Ⅱ组肾脏TT_4水平和NC组比较没有差异(18.94±2.47 ng/g VS20.26±3.08 ng/g,P=0.359),肾脏TT_3水平显著低于NC组(1.58±0.77 ng/g VS2.90±1.09 ng/g,P<0.05);L-T_4处理Ⅱ组肝脏TT_4水平和NC组没有差异(35.65±5.07 ng/g VS 37.97±4.71 ng/g,P=0.358),肝脏TT_3水平显著低于NC组(1.88±0.92 ng/g VS 3.04±1.17 ng/g,P<0.05)。 结论 对大鼠采用甲状腺全切术,再皮下注射剂量为0.95μg/100g体重的L-T_4可以成功获得亚临床甲减的动物模型。……   
[关键词]:亚临床甲状腺功能减退症;大鼠;动物模型;甲状腺素
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国医科大学2008年