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建立IAC-HPLC检测红曲米中的桔霉素

郭雪梅

   桔霉素(Citrinin,CIT)是由青霉属、曲霉属和红曲霉的某些菌株产生的一种广泛污染玉米、大米、小麦等农作物的真菌毒素,在红曲米中的污染尤为普遍,对动物及人类具有肾毒性、致畸性、致癌性等。目前检测CIT的主要方法有薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附检测法等。 本研究建立了免疫亲和柱联高效液相色谱法(Immunoaffinity column-High Performance Liquid Chromatography,IAC-HPLC)检测红曲米中的CIT;并用此方法检测了41份市售及实验室自制的红曲米样品中的CIT含量。主要研究内容和结果如下: 1抗CIT单克隆抗体免疫亲和柱的制备 将纯化好的抗CIT单克隆抗体与溴化氰(CNBr)活化的琼脂糖凝胶(Sepharose)4FF偶联。采用紫外扫描鉴定偶联反应,间接竞争ELISA方法及HPLC方法检测制备好的免疫亲和柱的柱容量。每根抗CIT单克隆抗体免疫亲和柱,用0.5mL活化胶,0.50mg抗CIT单克隆抗体,柱容量为0.35μg。 2建立了分析红曲米中CIT IAC-HPLC 该方法线性范围100μg/kg~600μg/kg,信噪比为3:1时,最低检测限为100μg/kg,超过日本的限量标准(200μg/kg);红曲米样品添加CIT标准品(100μg/kg~600μg/kg),用70%甲醇水溶液提取样品中CIT,经免疫亲和柱净化、0.01mol/L的PBS淋洗、纯甲醇洗脱,HPLC荧光法检测,平均回收率分别为74.2%~87.14%,相对标准偏差分别为2.85%~13.12%。 3市售红曲米中CIT含量的测定 采用本研究建立的IAC—HPLC方法对41份红曲米样品中的CIT含量进行了检测。IAC—HPLC分析的结果显示,其中有25份红曲米样品中桔霉素含量超过日本的标准(200μg/kg),超标率61.0%,红曲米中CIT含量为100μg/kg~986μg/kg。……   
[关键词]:桔霉素;红曲米;免疫亲和柱;高效液相色谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南昌大学2007年