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CTLA-4/IgG4融合蛋白在CHO/DG44细胞中的高效表达

许松梅

   目的:研究在中华仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)真核表达系统中CTLA-4/IgG4融合蛋白的表达,将质粒pMMGR和pMM-CTLA4-IgG4/WG共转染CHO/DG44细胞;纯化所表达的CTLA-4/IgG4G4融合蛋白,并从中筛选出表达量最高的阳性克隆细胞,为CTLA-4/IgG4的功能研究和临床应用奠定基础。 方法:以限制性酶NdeⅠ和NotⅠ分别对质粒pMMGR和质粒pMM-CTLA4-IgG4/WG进行限制性酶切消化使其线性化,将线性化的质粒pMMGR和pMM-CTLA4-IgG4/WG共转染CHO/DG44细胞,经G418和MTX筛选14天后,对阳性克隆进行无血清悬浮培养,Western blot检测细胞培养液中CTLA-4/IgG4融合蛋白的表达,筛选出高效稳定表达CTLA-4/IgG4融合蛋白的CHO细胞;Protein A-Agarose亲和层析纯化所表达的CTLA-4/IgG4融合蛋白;SDS-PAGE电泳、Western印迹等对纯化的CTLA-4/IgG4融合蛋白的相对分子质量、纯度、抗原特异性进行生物学鉴定。 结果:筛选出了能高效稳定表达CTLA-4/IgG4融合蛋白的CHO细胞;纯化后的CTLA-4/IgG4融合蛋白在SDS-PAGE电泳后出现一条与预期分子量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG-HRP抗体特异结合。 结论:获得了能够表达CTLA-4/IgG4融合蛋白的阳性克隆CHO/DG44细胞;这种细胞经MTX梯度浓度加压筛选后能够高效表达CTLA-4/IgG4融合蛋白。……   
[关键词]:CTLA-4/IgG4融合蛋白;pMMGR;转染;共扩增;的塞米松;诱导;高效表达;亲和层析;纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川大学2007年