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Agaricus blazei Murill提取物(FA-2-b-β)抗肿瘤药效学与分子生物学机理研究

孙延庆

   肿瘤目前仍是临床难以治疗的疾病之一,对人类的健康有很大危害,现在临床治疗肿瘤的主要方法是手术、化疗、放疗,一方面给病人带来生存的希望,同时也给病人带来较大创伤。化疗、放疗副作用较大,使病人恢复的较慢,多年来众多学者一直在寻找寻找有效治疗恶性肿瘤的药物,尤其是筛选高效、低毒、低成本的天然药物,倍受生物学和医学界的关注。 姬松茸(Agricus blazei Murill)又名小松菇、柏氏蘑菇、巴西蘑菇,属担子菌亚门,层菌纲,伞菌目,蘑菇(黑伞)科,蘑菇(黑伞)属。1965年,日裔巴西人古本隆寿将在巴西圣保罗皮埃达德郊外农场草地上采到的一种不知名的美味食用菌送到了日本。日本三重大学农学部的岩出亥之助教授对这种无名菌种进行了菌种分离和培养实验,并取名为姬松茸,中文为小松口蘑之意。1967年,由比利时的海涅曼博士鉴定为新种,并命名为,与双孢蘑菇Abisporus同属。此后,开始了姬松茸的基础研究。1975年,日本的室内高垄栽培法首次获得成功,经努力改良才确立了现在的大规模人工栽培方法。1995年中国科学院植物所梁净教授用来自巴西原始森林的野生菌种在福建栽培成功,命名为国产姬松茸。多年来,很多学者对姬松茸的有效成分及其药用价值进行了深入的研究,发现姬松茸多糖具有抗肿瘤、提高机体免疫力及抗突变、杀菌作用,还可改善肝脏功能并促进造血。因此该物质已受到人们的广泛重视。但是,姬松茸多糖对哪些肿瘤有抑制作用,尤其是作用的分子机理是什什么都有待深入研究。关于姬松茸多糖的抗癌性,国内外学者主要是用姬松茸粗提物和荷瘤小鼠进行研究,而无人将姬松茸分离纯化后的有效成分处理白血病细胞和胃癌细胞进行抗肿瘤研究。 因此,本研究采用噻唑蓝(MTT)还原法、流式细胞分析技术、DNA琼脂糖凝胶电泳技术、端粒酶活性测定、Caspase-3蛋白表达分析、bcl-2蛋白表达分析及光镜和透射电镜观察等技术和方法对Agaricus blazei Murrill水溶性多糖提取物FA-2-b-β和AZT的诱导肿瘤细胞凋亡,FA-2-b-β对化疗药的增敏作用及其相应机理等进行了深入研究。结果表明:1.FA-2-b-β可明显抑制体外培养人胃癌MKN45细胞和人急性早幼粒细胞性白血病HL-60细胞的增殖。FA-2-b-β作用72h对人胃癌MKN45细胞的抑制率可达49.44%以上,而对人急性早幼粒细胞性白血病HL-60细作用96h抑制率高达82%;AZT可明显抑制体外培养人胃癌MKN45细胞的增殖,作用72h后抑制率高达56.37%。证明FA-2-b-β、AZT具有良好抗癌效果。2.实验首次证明,AZT、FA-2-b-β可明显诱导体外培养人胃癌MKN45细胞和人急性早幼粒细胞性白血病HL-60细胞的凋亡。并能改变上述细胞的细胞周期时相分布,使细胞在G_1期发生严重阻滞,这是诱导人胃癌MKN45细胞和急性早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡的重要分子机理之一;3.本实验同时证明,AZT、FA-2-b-β可使体外培养人胃癌MKN45细胞和人急性早幼粒细胞性白血病HL-60细胞的端粒酶活性明显降低,这是提取物抑制体外培养人胃癌细胞和人急性早幼粒细胞白血病细胞增殖的又一重要分子机理;4.本研究首次发现,AZT、FA-2-b-β可上调体外培养人胃癌MKN45细胞和人急性早幼粒细胞性白血病HL-60细胞的Casase-3基因表达水平。这是提取物诱导该细胞凋亡、细胞周期改变和细胞增殖在G1期发生阻滞的重要分子基础;5.同时发现AZT可使体外培养人胃癌MKN45细胞细胞的bcl-2基因的表达水平降低,是该细胞凋亡、细胞周期改变和细胞增殖在G1期发生阻滞的又一重要分子机制,并与Caspase-3基因表达的改变相互协调、相互促进来诱导体外培养人胃癌MKN45细胞的凋亡;6.本实验还首次证实,FA-2-b-β联合AZT明显高于单独用药组,FA-2-b-β对AZT具有增效作用。 综上所述,AZT、FA-2-b-β对人胃癌MKN45细胞和人急性早幼粒细胞性白血病HL-60细胞的增殖均有明显抑制作用,可明显诱导上述恶性肿瘤细胞的凋亡,使细胞增殖发生明显阻滞;对恶性肿瘤细胞凋亡的诱导又与抑制其端粒酶活性、改变Caspase-3和bcl-2基因表达水平有密切关系。同时发现FA-2-b-β联合AZT明显高于单独用药组,FA-2-b-β对AZT具有增效作用。研究表明,从国产姬松茸多糖中分离的RNA蛋白复合物FA-2-b-β本身具有一定的抑制癌细胞效果,又能减轻化疗药物(AZT)的毒副作用,对化疗药物(AZT)有增效作用,如与化疗药物(AZT)结合使用,可能会在不降低疗效的前提下,减少化疗药物(AZT)的用量,降低其毒副作用。因此FA-2-b-β作为化疗辅助药物进行开发应具有很好的临床应用前景。……   
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