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Hcy,ox-LDL对ER及LDLR基因表达及其甲基化调控的影响

黄玉珊

   动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是危害人体健康的常见病和多发病,是发达国家最普遍的死因,也是众多发展中国家所面临的增长最快的死因之一。由于AS的发病机理不明确,几十年来对AS的防治尚乏有效的措施,因此深入探讨动脉粥样硬化发病机制,对AS的防治、降低死亡率显得尤为迫切和重要。 DNA甲基化是后天性的基因修饰过程,是基因对外界环境因素发生应答的机制之一。越来越多的证据显示,DNA甲基化紊乱出现在多种疾病中,包括肿瘤、某些X-联锁的遗传疾病、自身免疫性疾病及衰老等。目前,在动脉粥样硬化中也发现存在着甲基化异常的现象,而雌激素受体(estrogen receptor,ER)α基因是目前已知的唯一的一个因其启动子区甲基化程度的异常增高,而与动脉粥样硬化的发生发展中相关的基因。 高同型半胱氨酸血症和氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)是公认的致动脉粥样硬化的两大危险因素,而这两大危险因素与基因的甲基化调控有无关联呢?低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)作为与动脉粥样硬化发生密切相关的受体,其功能的下降又是否与甲基化的紊乱相关呢?带着这些疑问,我们选择了平滑肌细胞和THP-1单核细胞作为研究对象,使用巢式甲基化敏感性PCR法检测ERα和LDLR基因启动子区的甲基化情况;使用免疫组织化学染色法检测ER的蛋白表达水平;使用酶联免疫吸附法检测LDLR的功能;使用半定量RT-PCR法检测ER和LDLR的mRNA水平;MTT法检测同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对平滑肌细胞的活力的影响;观察在不同浓度的Hcy和ox-LDL作用不同时间下,平滑肌细胞和THP-1细胞的ERα和LDLR基因启动子区的甲基化状态、ERα和LDLR的蛋白表达水平及其mRNA水平有无变化。 实验结果发现ERα基因启动子区的甲基化程度随着Hcy作用浓度及作用时间的增加而增加,并且随着其甲基化程度的增加,免疫组化结果显示ERα的蛋白表达水平也随之下降,RT-PCR结果显示ERα的mRNA表达水平亦随之下降;MTT结果显示平滑肌细胞在Hcy作用下随着ERα活性的下降而出现增殖的现象;LDLR基因启动子区的甲基化在Hcy作用下未发现明显变化;ERα基因在低浓度的ox-LDL作用下,从原来的去甲基化状态转化为部分甲基化状态,但在高浓度的ox-LDL作用下,又恢复去甲基化状态;ox-LDL对LDLR基因的甲基化并无明显的影响。 因此认为Hcy具有一定的促甲基化的作用,但这种作用具有一定的基因特异性,对ERα基因表现出明显作用,但对LDLR基因作用不明显;ox-LDL对甲基化的调控作用不明显。……   
[关键词]:同型半胱氨酸;氧化型低密度脂蛋白;雌激素α受体;低密度脂蛋白受体;甲基化;动脉粥样硬化
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:四川大学2007年