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亚砷酸钠诱导氧化损伤的体外实验研究

李娜

   目的研究亚砷酸钠(NaAsO_2)对人肺腺癌A549细胞的细胞毒性作用和氧化损伤作用,探讨其对DNA损伤特异性修复基因表达的影响,从而为阐明NaAsO_2是否直接导致DNA损伤提供体外实验依据,以便深入研究其氧化损伤作用同致癌作用之间的关系。 方法用0、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、100.0μmol/L的NaAsO_2染毒A549细胞,观察细胞的生长特性,通过MTT实验记录染毒12、24、48、72 h的细胞存活率变化规律,并计算出NaAsO_2的细胞毒作用剂量,为后续实验提供染毒剂量参考;通过集落形成抑制实验观察NaAsO_2对细胞集落形成能力的影响;通过观察群体倍增时间检测NaAsO_2对细胞的增殖能力的影响。用没有明显细胞毒作用剂量的NaAsO_2染毒人肺腺癌A549细胞24 h,检测抗氧化酶活性,以观察NaAsO_2对细胞抗氧化能力的影响;体外微核实验检测NaAsO_2对A549细胞的染色体损伤效应;彗星实验比较苯并(a)芘(BaP)和NaAsO_2单独及联合染毒细胞后,细胞DNA氧化损伤与修复的差异,观察BaP、NaAsO_2染毒剂量和染毒顺序的交互作用,为NaAsO_2对DNA氧化损伤和修复的影响效应提供依据。最后,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(West blot)分别测定细胞中人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶-1(human 8-oxoguanine DNA glycosylase-1,hOGG1)mRNA和蛋白表达量,观察NaAsO_2诱导的细胞氧化损伤和特异性修复基因hOGG1表达量之间的关系,从而为完善NaAsO_2的致癌机制提供更完整的参考。 结果NaAsO_2具有极强的细胞毒性,其毒作用呈现毒物兴奋性剂量-反应关系。染毒后,A549细胞的MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性变化的剂量—效应曲线呈倒置“U”形;NaAsO_2引起细胞微核形成增加;NaAsO_2单独作用不直接引起DNA损伤,但在联合BaP染毒时,却能显著增强BaP所致的DNA损伤,抑制损伤的修复,且NaAsO_2预作用24 h后观察到的DNA损伤较同时染毒和BaP预作用24 h观察到的DNA损伤更严重;NaAsO_2可以抑制hOGG1mRNA及其蛋白的表达,抑制作用有随剂量增加而增强的趋势。 结论NaAsO_2具有明显的细胞毒性,能引起细胞氧化损伤,其单独作用时不直接损伤DNA,但能通过抑制DNA氧化损伤修复基因hOGG1的表达,降低细胞DNA损伤的修复,从而增强另一种基因毒物所致的DNA损伤。……   
[关键词]:NaAsO_2;增殖抑制;氧化损伤;DNA损伤修复;hOGG1
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川大学2007年