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水貂犬源犬瘟热病毒的分离鉴定及H基因的序列分析

宗春苗

   犬瘟热是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)引起的一种急性、传染性极强的烈性传染病。CDV属于副粘病毒科麻疹病毒属,该病毒只有一个血清型不同毒株拥有共同的可溶性抗原,各毒株在抗原性上没有区别。该病毒呈世界性分布,自然条件下感染肉食目中犬科、鼬科、浣熊科等多种动物,尤其对毛皮经济动物危害严重。特种经济动物因为其本身的经济价值很高,一旦发生传染病损失严重,因此有必要对患传染病的动物进行治疗和紧急预防,将损失降到最小。但目前犬瘟热没有治疗的良方,只能通过疫苗来控制。因此犬瘟热疫苗的研究一直是世界各地学者研究的热点。 本实验采用Vero细胞从山东某貂场的疑似CD的貂肝脏内分离出1株病毒,对其培养特性、细胞毒力、生物学特性、免疫学和分子生物学鉴定。经鉴定该病毒为犬瘟热病毒(CDV),命名为CDVSJ。根据GeneBank中所发表的CDV Onderstepoort株的H基因设计了1对特异性引物,对CDVSJ H基因进行RT-PCR扩增,扩增产物与pMD18-T simple vector连接,转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中进行克隆。提取质粒进行PCR和双酶切鉴定,鉴定为阳性的送去测序。去掉两端酶切位点测出长1596bp的目的基因条带与预计的完全相符。并将测序结果与Genebank中发表的15个CDV株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。分析的结果表明:所有的基因分为2组,一组由弱毒株组成,另一组由野生型组成一组,野生型又可分为不同的基因型。本实验室分离的CDVSJ在基因进化树上与弱毒为一组,它与国内的低毒疫苗株strain CDV3的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性均最高分别为99.1%和98.1%,而与野生型Hamamatsu核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性均最低分别为90.9%和90.4%。编码氨基酸比较结果,所有毒株都含有12个半胱氨酸残基,其中只有strain CDV3有一处不同在414位(其它在304位),在CDV毒株中半胱氨酸残基是很保守的。CDVSJ此段H基因含有5个潜在的天冬氨酸糖基化位点;此段疫苗株仅含3个;strain CDV3和Convac都含有6个与分离株不同的在530aa~532aa;Hamatsu有8个,其它3处在236Aa~238Aa、511aa~513aa和530aa~532aa;Danish dog有7处,其它在236Aa~238Aa和530aa~532aa。在511aa~513aa是Hamamatsu强毒株所特有的而弱毒株没有的。 本实验通过对该分离株的研究表明,该分离株可能是一株弱毒株,为弱毒疫苗提供了后备毒株;同时对该分离株的H基因的序列及编码氨基酸的比较表明它与其它的CDV毒株有一定的差异,这些差异为研究犬瘟热免疫失败提供分子生物学依据。为犬瘟热的预防提供理论依据。……   
[关键词]:犬瘟热;分离鉴定;H基因;序列分析
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:吉林农业大学2007年