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清胆滋肾方治疗大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的实验研究

骆黎静

   妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是以妊娠期发生皮肤瘙痒、黄疸为主要症状,伴胆酸、肝酶等生化异常,产后各种症状迅速消失为特征的妊娠期并发症。该病主要对胎儿造成较大的危害,易引起早产、养水胎粪污染、胎儿宫内窘迫、胎死宫内等不良预后,现在已被列入高危妊娠。目前,ICP的临床治疗以药物治疗为主,西医以熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)、消胆胺,苯巴比妥,地塞米松等为主要治疗药物。这些药物治疗虽可取得缓解症状作用,但停药后症状反复,若临床长期使用均有不良反应,且对胎儿的毒性作用较大。中医药在临床治疗ICP方面有其独到调节治疗作用,且至今未见明显不良反应报道。清胆滋肾方是在临床名老中医经验用方基础上自拟而成,本课题试图从血生化指标、胎鼠成活率和肝组织病理学改变、肝细胞间黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)和胎盘雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达、胎盘细胞凋亡及凋亡调控基因Bax、Bcl-2的表达等方面来研究清胆滋肾汤对ICP的治疗作用及其可能的作用机制。 第一部分清胆滋肾汤对肝内胆汁淤积孕鼠血清生化指标、胎鼠成活率及肝脏组织病理学改变的影响 [目的]探讨ICP大鼠血清生化指标、胎鼠成活率及肝脏组织病理学改变的影响,为清胆滋肾汤治疗ICP提供生化和病理学实验依据。 [方法]采用苯甲酸雌二醇(Estradioli Benzoas,EB)来诱导大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的模型,设立正常组、模型组、清胆滋肾汤高剂量组、中剂量组、低剂量组和UDCA组六个组,造模的同时连续给药,中药治疗组灌胃至临产,西药治疗组连续灌胃5天。各组均于见阴道血性分泌物时终止妊娠,摘眼球法取血,断头处死后留取2块新鲜肝脏和1块胎盘组织,待做光镜和电镜标本。剖宫取出胎鼠,观察胎鼠成活率。运用全自动生化分析仪测定各组孕鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、总胆酸(total bile acid,TBA)值。 [结果]模型组的各项生化指标水平升高,与正常组相比有极显著性差异(P<0.01),经治疗后,高剂量组的AST、ALP水平无显著改善(P>0.05),其ALT、TBIL、TBA水平则显著降低(P<0.05或P<0.01)。其它各治疗组相关生化指标均有极显著性下降(P<0.01)。在对ALT、AST、ALP、TBIL的改善上,中剂量组疗效最好,与正常组相比无统计学差异(P>0.05),中剂量组ALP、TBIL的水平显著低于UDCA组(P<0.05),而中剂量组ALT、AST的水平与UDCA组相比无显著差异(P>0.05);在对TBA的改善上,UDCA组效果最好,与正常组相比无显著差别(P>0.05),中药治疗组中中剂量组效果最好,与UDCA组相比无统计学差异(P>0.05),与正常组相比亦无明显差异(P>0.05)。 胎鼠成活率结果显示:模型组的胎鼠成活率降低,与正常组相比有极显著性差异(P<0.01),除高剂量组外,各治疗组均可非常显著地提高ICP孕鼠的胎鼠成活率(P<0.01),且与正常组相比无统计学差异(P>0.05),尤以中剂量组效果最好,但与UDCA组相比无显著差异(P>0.05)。 肝脏组织病理学研究显示:光镜下可见正常组肝细胞结构清晰,无变性与坏死。模型组肝细胞肿胀,部分呈空泡样变性,肝窦间隙狭窄明显,少数肝毛细胆管扩张,内有胆拴形成。清胆滋肾汤高剂量组孕鼠肝脏光镜下可见肝细胞结构较紊乱,肝窦间隙较狭窄,但未见明显胆栓形成。中、低剂量组和UDCA组光镜下观察与正常组无显著差异。电镜下可见,正常组肝细胞线粒体嵴正常,毛细胆管不扩张,无胆盐沉积,超微结构无明显改变;模型组部分毛细胆管扩张,微绒毛脱落,内见电子密度高的无定形物(可能为胆汁淤积)。 [结论]清胆滋肾汤可能通过改善ICP大鼠的血清生化指标,影响其肝脏病理学形态,从而提高胎鼠的成活率。提示该方药具有良好的治病安胎之功效。 第二部分清胆滋肾汤对肝内胆汁淤积孕鼠肝脏ICAM-1及胎盘ER表达的影响 [目的]通过检测各组孕鼠肝脏ICAM-1及其胎盘ER的表达,来探讨清胆滋肾汤的疗效及其可能的作用机理。 [方法]孕鼠肝组织和胎盘组织石蜡切片采用免疫组化SABC法分别检测ICAM-Ⅰ和ER的表达。 [结果](1)模型组ICAM-1的表达增强,与正常组相比较有极显著性差异(P<0.01);各中药组ICAM-1的表达降低,与模型组相比均有极显著性差异(P<0.01),与正常组和UDCA组相比均无显著性差异(P>0.05)。(2)模型组ER的表达显著高于正常组(P<0.05),除高剂量组外,各中药治疗组ER的表达降低,与模型组相比有极显著性差异(P<0.01);除低剂量组外,各中药治疗组ER的表达与正常组相比均无显著性差异(P>0.05),与UDCA组相比,亦无统计学差异(P>0.05)。 [结论]清胆滋肾汤能够明显地抑制ICP大鼠肝脏ICAM-1及胎盘ER的上调,提示清胆滋肾汤治疗ICP的可能作用点。 第三部分清胆滋肾汤对肝内胆汁淤积孕鼠胎盘细胞凋亡及凋亡调控基因Bax、Bcl-2表达的影响 [目的]通过检测各组孕鼠胎盘细胞的凋亡及凋亡调控基因Bax、Bcl-2的表达来探讨清胆滋肾汤的疗效及其可能的作用机理。 [方法]孕鼠胎盘组织石蜡切片采用原位末端脱氧核糖核苷转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)法检测胎盘细胞凋亡。胎盘凋亡调控基因Bax、Bcl-2的检测采用免疫组化SABC法。 [结果]凋亡结果显示,各治疗组可以不同程度地减少凋亡的细胞数,尤其以中剂量组治疗效果更为明显。 免疫组化结果显示:模型组Bax的表达增强,Bcl-2的表达下降,与正常组相比有极显著性差异(P<0.01),各治疗组均可显著地下调Bax的表达(P<0.05或P<0.01),极显著地上调Bcl-2的表达(P<0.01),尤以中剂量组效果最为显著。 [结论]清胆滋肾汤可能通过抑制促凋亡基因Bax及诱导抗凋亡基因Bcl-2的表达来抑制ICP大鼠胎盘细胞的过度凋亡,从而改善孕鼠的妊娠结局。……   
[关键词]:@清胆滋肾汤;胆汁淤积;肝内;细胞间黏附分子;受体;雌激素;凋亡
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:湖北中医学院2007年