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鸡毒霉形体黏附蛋白及与其相互作用蛋白的初步研究

高俊伟

   鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是鸡慢性呼吸道病(Chronic respiratory disease,CRD)的病原菌。本病在鸡群中感染普遍,血清学阳性率高,给养禽业造成严重的经济损失。许多研究发现,MG表面的黏附蛋白(Protein Mycoplasma Gallisepticum Adheain,pMGA)通过宿主上的受体侵染宿主,为了阐明pMGA与宿主受体之间的关系及其在MG侵染宿主中的作用,本研究进行了如下试验:一、对H-pMGA1.2基因原核表达条件进行了优化,获得了pKG-pMGA1.2可溶性表达的最佳条件;通过亲和层析的方法,纯化出纯度达96%并有较高免疫学活性的目的蛋白。二、以纯化的pMGA1.2为“靶蛋白”,通过免疫荧光组织化学法来验证“靶蛋白”与SPF鸡胚的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、气管等组织的结合情况:提取以上各组织的膜蛋白,用Dot-ELISA验证各组织膜蛋白与“靶蛋白”的结合情况;组织膜蛋白进行SDS-PAGE分析。主要的试验结果如下: 1.pKG-pMGA1.2可溶性表达的最佳条件是诱导温度22℃,诱导时间8h,培养基pH值7.0,IPTG浓度0.05mmol/L。在该条件下,目的蛋白在裂解液全菌体和上清液中均大量表达,分别达到18.5%和17%。 2.取20日龄SPF鸡胚的气管、心、肺、肝、肾、十二指肠上、法氏囊、腺胃、胸腺和脾脏等组织制成石蜡切片,再选用不同浓度的pMGA1.2与其作用,然后用兔源的MG阳性血清和FITC标记的羊抗兔IgG来检测结合的情况。结果表明:除脾脏外,其他组织中均存在与pMGA1.2特异性结合的蛋白。 3.提取各组织膜蛋白经处理后点到硝酸纤维素膜上,选用纯化的pMGA1.2与其作用,再用兔源的MG阳性血清与HRP标记的羊抗兔IgG来进一步检测结合情况。Dot-ELISA检测发现除脾脏外其他九种组织的膜蛋白中均含有与pMGA1.2相互作用的蛋白。 4.通过SDS-PAGE对各组织膜蛋白进行分析,发现除脾脏外的其他各组织膜蛋白中均有一条分子量约为30kD的主带。因此,我们推测该蛋白很可能是与pMGA1.2相互作用的蛋白。……   
[关键词]:鸡胚;鸡毒霉形体;pMGA;相互作用蛋白
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2007年