手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

龙晓婷

   伪狂犬病(Pseudorabies)又称奥捷士奇病(Aujeszky’s disease,AD),是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。猪是该病毒的天然宿主和贮存宿主,常为流行性感染。自1902年发现以来,伪狂犬病已在全球范围内流行,并给我国乃至全球养猪业造成了巨大的经济损失,成为严重危害养猪业的重大传染病之一,预防、控制从而最终根除该病是我国当前面临的一项艰巨任务。与同属α-疱疹病毒亚科的人单纯-疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒和牛疱疹病毒Ⅰ型等一样,PRV具有潜伏感染和神经嗜性等α-疱疹病毒的典型特征。因此,PRV对于研究α-疱疹病毒在自然宿主中的增殖与分布、神经嗜性、致病机理、免疫反应及新型疫苗效力评价等方面具有很大的优越性,颇受疱疹病毒研究学者的青睐,并成为α-疱疹病毒研究的良好模型。 本研究为了建立潜伏感染动物模型,通过ELISA方法对四周龄仔猪的血清进行检测,确定仔猪为PRV阴性仔猪后购进。进栏3d后用猪伪狂犬病油乳剂灭活疫苗对仔猪进行首次免疫,两个星期后进行二免。同时前腔静脉采血,用中和试验检测仔猪血清抗体水平。当中和抗体效价为1:2或1:2以上时,则判为PRV抗体阳性,可以对仔猪进行攻毒。TCID_(50)测定攻毒用的PRV标记毒株gG~-/LacZ~+的滴度为10~(-6.5)/0.1mL,从而确定攻毒的量为滴鼻2 mL。攻毒后1—35d内早上和下午分别采集攻毒实验猪的鼻拭子,同时进行体温测量。通过PCR方法对PRV的gD基因进行检测,发现攻毒4d后猪不再排毒。攻毒后40d,对两头实验猪按2mg/kg的剂量肌肉注射地塞米松。 为了研究PRV潜伏感染时在组织内的分布,通过颈静脉放血,在攻毒后0dpi,7dpi,14dpi,21dpi,28dpi,35dpi等分别剖杀一头实验猪。迅速取大脑、小脑、脑干、三叉神经、视神经、扁桃体、肺和肾等组织,一部分经液氮冷冻后置-80℃保存,用于DNA、RNA和蛋白质的提取与分析;另一部分放入4%多聚甲醛内固定,经系列浓度乙醇脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋切片,厚度为5pm。将切片分为两套,一套做常规HE染色(粘片剂为蛋白甘油),另一套做SABC染色(粘片剂为多聚赖氨酸)。 SABC染色观察,结果表明,在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经、视神经和非神经组织的扁桃体、肺、肾等组织内均发现阳性细胞。阳性细胞的数量随攻毒时间的延长主要呈减少趋势,但在注射地塞米松后,阳性细胞数量增加。病毒存在于被感染细胞的细胞质和细胞核内,以细胞质为主。所设对照实验,均未见到阳性细胞。 H.E染色观察显示,攻毒初期大脑出现明显的非化脓性脑炎变化;小脑内有血管反应;视神经出现萎缩;神经细胞变性、坏死;扁桃体内淋巴细胞坏死,数目减少;肺呈现间质性肺炎变化,同时肺内淋巴结内的淋巴细胞高度增生;肾脏内肾小球萎缩,淋巴细胞浸润。以上病理变化随攻毒时间延长,病变减轻。但是注射地塞米松后,病变加重。 通过对两种不同染色结果进行观察、比较和分析,揭示了病毒对不同组织细胞的嗜性和时间变化规律,为PRV潜伏感染的进一步研究提供了组织学实验数据。……   
[关键词]:伪狂犬病毒;潜伏感染;地塞米松;SABC法;分布
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2007年
App内打开