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RAPD对树莓栽培品种及插田泡(Rubus coreanus)类型的遗传差异分析

李玲

   本研究在形态学调查的基础上利用RAPD分子标记技术对18个树莓栽培品种和西充与雅安8个插田泡(R.coreanus)类型进行了遗传差异分析。主要结果如下: 1.通过对比SDS法、CTAB法和核DNA法获得到的DNA分析后认为,核DNA法是提取树莓基因组总DNA的最适方法。核DNA法的DNA得率和纯度较高,颜色洁白,完全能够满足RAPD扩增要求。 2.通过优化反应体系,建立了树莓RAPD技术最佳反应体系。即25μL反应体系中含模板DNA20ng,1×buffer,Mg~(2+)2.0mmol·L~(-1),引物为0.6μmol·L~(-1),dNTPs0.24mmol·L~(-1),TaqDNA聚合酶1.5U。反应程序为:94℃预变性4min;94℃1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,45个循环;完成最后一个循环后,在72℃下继续延伸10min,然后在4℃保温。最后用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。 3.从85个随机引物中筛选出20个多态性强、稳定性好、重复性高的随机引物,用于26个树莓品种和类型的RAPD分析。扩增DNA片段长度在200-4000bp之间,多集中于400-2000bp之间。扩增DNA谱带总数251条,多态性谱带235,占总数的93.6%。得到了20个引物对26份树莓材料清晰的指纹图谱,能够充分鉴定树莓品种和类型。 4.依据RAPD标记数据,计算出26份树莓材料的遗传距离,并以此将供试材料划分为4类。UPGMA聚类分析显示与形态学上树莓种群、黑莓种群的分类结果基本一致。种群内亚组的划分体现出一定的地理差异,并与果实颜色以及植株的繁殖特性有关。 5.在树莓属植物上,RAPD的稳定性和可重复性得到了进一步的证实,因此对树莓系统发育的分析可扩大RAPD扩增引物量和样本量,以更多的多态位点对更多群体进行系统分析,从而验证并修订已有的形态学性状经典分类,也为新种的鉴定增添了一种重要的手段。……   
[关键词]:RAPD标记;树莓;插田泡;遗传差异
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2007年