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黄瓜花叶病毒M株系侵染性cDNA克隆的构建及3a基因的原核表达

谈珺

   以感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)M株系的白肋烟为材料,提取植物总RNA,通过反转录合成cDNA,通过PCR扩增分别获得了CMV-M基因组3段全序列—RNA1、RNA2和RNA3。构建了噬菌体T7 RNA聚合酶启动子控制下的CMV-M三段全长cDNA克隆pUC-1、pUC-2和pUC-3。序列分析表明CMV-M RNA1全长3361个核苷酸,含有一个开放阅读框架(ORF1),编码分子量为112ku的1a蛋白。5’NTR长93nt,3’NTR长222nt;RNA2全长3037个核苷酸,含有两个开放阅读框架(ORF2,3),编码分子量为96.7ku的2a蛋白以及分子量为13.1ku的2b蛋白。5’NTR长87nt,3’NTR长299nt。CMV-M RNA3全长2215个核苷酸,含有两个开放阅读框(ORF4,5),分别编码分子量为31ku的3a蛋白和分子量为24ku的外壳蛋白(CP)。5’NTR长120nt,3’NTR长289nt。 将CMV-M全长基因组cDNA分别克隆至pUC18载体中得到pUC-1、pUC-2和pUC-3。将重组质粒pUC-1、pUC-2和pUC-3用限制性内切酶SphⅠ线性化,以该线性化产物为模板进行体外转录,体外转录物混合摩擦接种于白肋烟表明具有侵染性,接种在叶片上产生与野生型病毒接种相同的花叶症状,同时可以在接种植物中检测到病毒RNA。 为近一步研究CMV-M 3a基因与病毒致病性间的关系,利用CMV-M RNA3全长cDNA克隆构建了运动蛋白MP(3a基因编码的移动蛋白)的原核表达载体。SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,MP基因在大肠杆菌BL21中高效表达。……   
[关键词]:黄瓜花叶病毒M株系;核酸序列;侵染性cDNA克隆;移动蛋白
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:湖南农业大学2007年